粘質沙雷氏菌(Serratia marcescens Bizic)PS-1屬于革蘭氏陰性菌,是一類高效的昆蟲致病菌。昆蟲取食帶病原物的食物,可通過腸道感染甜菜夜蛾等多種農業(yè)害蟲。昆蟲腸道免疫系統(tǒng)是防御PS-1侵染的第一道防線,但其免疫分子機制不清楚。為從蛋白水平上闡明甜菜夜蛾腸道免疫PS-1的分子機制,本研究利用iTRAQ技術測定PS-1侵染甜菜夜蛾5齡幼蟲第3d的腸道蛋白質組,以本實驗室深度測序的轉錄組為參考,篩選出甜菜夜蛾腸道免疫PS-1的差異蛋白211個,其中上調蛋白86個,下調蛋白125個。為從mRNA水平去檢測差異蛋白的表達情況,我們從蛋白庫中篩選出差異表達比較大的蛋白點,結合轉錄組獲得的unigene片段。篩選了11個差異基因(JNK、Afadin、Hemolin、Unigene19139、Unigene50、Unigene25585、Unigene29765、Unigene4584、C L1044、Unigene14488、C L2840),qRT-PCR結果顯示,甜菜夜蛾在飼喂PS-1第3d,JNK、Unigene19139、Unigene29765分別上調3、2、4倍...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮寫詞及英漢對照
1 前言
    1.1 昆蟲的免疫系統(tǒng)概述
    1.2 昆蟲的腸道免疫應答機制
    1.3 JNK和Afadin的研究進展
    1.4 iTRAQ的應用現(xiàn)狀
    1.5 甜菜夜蛾的危害現(xiàn)狀
    1.6 粘質沙雷氏菌在防治害蟲和生產上的應用
    1.7 粘質沙雷氏菌的研究進展
    1.8 研究的目和意義
2 實驗材料
    2.1 供試菌株
    2.2 供試昆蟲
    2.3 主要儀器設備
    2.4 主要試劑藥品
    2.5 主要培養(yǎng)基
    2.6 主要試劑的配制
    2.7 SDS-PAGE相關溶液的配制
    2.8 Western blot相關溶液的配制
3 實驗方法
    3.1 粘質沙雷氏菌PS-1處理甜菜夜蛾
    3.2 iTRAQ測序流程
        3.2.1 iTRAQ質譜原始數(shù)據(jù)處理
        3.2.2 基因功能注釋
        3.2.3 KEGG通路注釋
        3.2.4 差異表達蛋白的篩選
        3.2.5 聚類分析
    3.3 差異表達蛋白所對應基因的qRT-PCR驗證
        3.3.1 PS-1菌液的配制
        3.3.2 處理與收集樣品
        3.3.3 實時熒光定量PCR
    3.4 甜菜夜蛾JNK和Afadin基因的克隆與序列分析
        3.4.1 甜菜夜蛾總RNA的提取和檢測
        3.4.2 甜菜夜蛾JNK和Afadin基因CDS序列的擴增
    3.5 Western blot檢測
        3.5.1 樣品制備
        3.5.2 濃度測定
        3.5.3 Western blot
4 結果與分析
    4.1 iTRAQ測序結果
        4.1.1 定量結果評估
        4.1.2 差異基因分析
        4.1.3 GO功能注釋
        4.1.4 GO功能顯著性富集分析
        4.1.5 KEGG富集分析
        4.1.6 差異蛋白的聚類分析
    4.2 差異表達蛋白對應基因的qRT-PCR驗證
    4.3 JNK和Afadin基因的克隆和序列分析
        4.3.1 甜菜夜蛾總RNA的提取
        4.3.2 JNK Unigene序列的克隆
        4.3.3 Afadin Unigene序列的克隆
        4.3.4 JNK和Afadin Unigene序列分析
        4.3.5 JNK在不同發(fā)育階段的表達分析
    4.4 Western blot
5 結論與討論
    5.1 結論
    5.2 討論
    5.3 展望
    5.4 本研究的創(chuàng)新點
致謝
特別感謝本論文贊助基金
參考文獻
附錄Ⅰ pMD18-T Vector map
附錄Ⅱ 引物



本文編號：3740961