桔小實蠅Bactrocera dorsalis（Hendel）是熱帶、亞熱帶地區(qū)重大的果蔬害蟲。目前化學農(nóng)藥是防治桔小實蠅的主要方法,其中有機磷殺蟲劑敵百蟲因其高效且對人類低毒而被廣泛應用于該蟲的防治。但由于敵百蟲的泛濫使用,導致桔小實蠅對敵百蟲的抗藥性不斷增強。桔小實蠅腸道中存在大量的共生菌,已有研究發(fā)現(xiàn)敵百蟲抗性品系桔小實蠅腸道中的檸檬酸桿菌明顯增加,經(jīng)分離鑒定后確定這種共生細菌為弗氏檸檬酸桿菌Citrobacter freundii-BD（CF-BD）。為了明確腸道共生菌CF-BD與桔小實蠅敵百蟲抗藥性的關系,本文研究了CF-BD對桔小實蠅敵百蟲抗藥性的影響,探清了CF-BD提高桔小實蠅對敵百蟲抗藥性的機制,闡明了該菌的傳播方式,不僅為桔小實蠅對殺蟲劑抗性產(chǎn)生的機制研究提供了新思路,也對未來桔小實蠅防治策略的制定提供了新的理論支持。主要研究結果如下:1、CF-BD對桔小實蠅敵百蟲抗藥性的影響為了明確CF-BD與桔小實蠅敵百蟲抗藥性是否有關,分別對喂食CF-BD后的敏感品系桔小實蠅、喂食抗生素以去除CF-BD的抗性品系桔小實蠅進行了敵百蟲毒力測定,結果發(fā)現(xiàn)喂食CF-BD的敏感品系桔... 

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要 abstract 1 前言
1.1 研究背景
    1.1.1 昆蟲的抗藥性
    1.1.2 昆蟲與共生菌
    1.1.3 高通量測序
    1.1.4 昆蟲共生菌的傳播
1.2 研究目的及意義
1.3 技術路線 2 CF-BD對桔小實蠅敵百蟲抗藥性的影響及在腸道中的定位
2.1 引言
2.2 材料與方法
    2.2.1 試驗材料
    
2.2.1.1 供試昆蟲
    
2.2.1.2 CF-BD的復蘇與培養(yǎng)
    2.2.2 試劑
    2.2.3 主要儀器
    2.2.4 敵百蟲對桔小實蠅的毒力測定
    2.2.5 喂食CF-BD后敏感品系桔小實蠅的抗藥性測定及菌落檢測
    2.2.6 去除CF-BD后抗性品系桔小實蠅的抗藥性測定及菌落檢測
    2.2.7 桔小實蠅成蟲腸道和內(nèi)生殖系統(tǒng)解剖
    2.2.8 熒光原位雜交（FISH）
    2.2.9 數(shù)據(jù)分析
2.3 結果與分析
    2.3.1 攝入CF-BD后敏感品系桔小實蠅的抗藥性增強
    2.3.2 去除CF-BD引起抗性品系桔小實蠅的抗藥性降低
    2.3.3 桔小實蠅成蟲內(nèi)生殖系統(tǒng)和腸道結構觀察
    2.3.4 CF-BD在桔小實蠅腸道內(nèi)的定位
2.4 小結 3 CF-BD全基因組測序及降解敵百蟲機制研究
3.1 引言
3.2 材料與方法
    3.2.1 試驗材料
    3.2.2 試劑
    3.2.3 主要儀器
    3.2.4 GC-MS鑒定敵百蟲的降解產(chǎn)物
    3.2.5 CF-BD基因組DNA提取
    3.2.6 CF-BD全基因組測序及注釋
    3.2.7 實時熒光定量PCR測定磷酸酶基因的表達
    3.2.8 數(shù)據(jù)分析
3.3 結果與分析
    3.3.1 CF-BD對敵百蟲的降解途徑
    3.3.2 CF-BD基因組分析及有機磷水解酶基因的篩選
    3.3.3 實時熒光定量PCR測定OPH相似基因的表達
3.4 小結 4 CF-BD在桔小實蠅田間種群中的分布及對寄主適合度的影響
4.1 引言
4.2 材料與方法
    4.2.1 試驗材料
    4.2.2 試劑
    4.2.3 主要儀器
    4.2.4 桔小實蠅DNA提取
    4.2.5 不同田間種群桔小實蠅中CF-BD的PCR和熒光定量PCR的檢測
    4.2.6 敵百蟲對田間種群桔小實蠅的毒力測定
    4.2.7 CF-BD對桔小實蠅適合度的影響
    
4.2.7.1 桔小實蠅三個蟲態(tài)干重的測定
    
4.2.7.2 桔小實蠅成蟲繁殖力、壽命和后代F1性比的測定
    4.2.8 數(shù)據(jù)分析
4.3 結果與分析
    4.3.1 不同田間種群桔小實蠅中CF-BD的PCR和熒光定量PCR檢測結果
    4.3.2 田間種群桔小實蠅抗藥性與體內(nèi)CF-BD數(shù)量的相關性
    4.3.3 CF-BD對桔小實蠅適合度影響的測定結果
4.4 小結
    4.4.1 田間種群桔小實蠅抗敵百蟲能力與其體內(nèi)CF-BD含量的關系
    4.4.2 CF-BD對桔小實蠅適合度的影響 5 CF-BD在桔小實蠅種群中的傳播途徑
5.1 引言
5.2 材料與方法
    5.2.1 試驗材料
    5.2.2 試劑
    5.2.3 主要儀器
    5.2.4 桔小實蠅各蟲態(tài)DNA提取
    5.2.5 引物設計與巢式PCR擴增
    5.2.6 CF-BD在桔小實蠅種群中的垂直傳播研究
    
5.2.6.1 平板檢測卵帶菌的情況
    
5.2.6.2 飼喂鏈霉素的桔小實蠅所產(chǎn)卵帶菌檢測
    
5.2.6.3 桔小實蠅各蟲態(tài)帶菌檢測
    5.2.7 CF-BD在桔小實蠅種群中的水平傳播研究
    
5.2.7.1 混合飼養(yǎng)后的幼蟲帶菌檢測
    
5.2.7.2 混合飼養(yǎng)后的成蟲帶菌檢測
    
5.2.7.3 交配過后成蟲內(nèi)生殖系統(tǒng)的帶菌檢測
    5.2.8 桔小實蠅產(chǎn)卵后的番石榴細菌 16S rDNA meta測序
    
5.2.8.1 番石榴的處理以及其細菌的富集
    
5.2.8.2 細菌總DNA提取
    
5.2.8.3 細菌 16S rDNA擴增和meta測序
    
5.2.8.4 生物信息學分析
    5.2.9 數(shù)據(jù)分析
5.3 結果與分析
    5.3.1 CF-BD在桔小實蠅種群中的垂直傳播檢測結果
    5.3.2 CF-BD在桔小實蠅種群中的水平傳播檢測結果
    5.3.3 桔小實蠅產(chǎn)卵后的番石榴細菌 16S rDNA meta測序結果分析
5.4 小結
    5.4.1 CF-BD在桔小實蠅種群中的垂直傳播
    5.4.2 CF-BD在桔小實蠅種群中的水平傳播
    5.4.3 桔小實蠅產(chǎn)卵后番石榴細菌 16S rDNA meta測序 6 結論與討論
6.1 結論
6.2 討論
    6.2.1 CF-BD對桔小實蠅敵百蟲抗藥性及適合度的影響
    6.2.2 CF-BD提高桔小實蠅抗藥性及降解敵百蟲的機制
    6.2.3 CF-BD在桔小實蠅中的傳播途徑
6.3 本文研究的創(chuàng)新點
6.4 有待深入研究的內(nèi)容 致謝 參考文獻 附錄A 基因序列信息 附錄B


【參考文獻】：
期刊論文
[1]弗氏檸檬酸桿菌對動物和人致病性研究進展[J]. 薛巧,趙戰(zhàn)勤,劉會勝,薛云,董發(fā)明.  動物醫(yī)學進展. 2015(07)
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3681182