香蕉（Musa spp.）為單子葉草本植物,屬于芭蕉科（Musaceae）芭蕉屬（Musa）,是僅位于水稻、小麥和玉米之后的第四大糧食作物,世界上鮮果消費量和貿易量最大的熱帶水果之一。然而,黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）和香蕉束頂病毒（Banana bunchy top virus,BBTV）病害大規(guī)模爆發(fā)和流行已成為限制香蕉大量生產的主要因素之一,也嚴重影響了香蕉產業(yè)的發(fā)展。因此本研究主要通過建立香蕉CMV和BBTV檢測的組織免疫印跡技術和明確這兩種病毒在巴西蕉不同部位及不同時間的相對含量變化兩方面內容,為有效防控病害奠定基礎。本研究利用SYBR Green實時熒光定量PCR中的絕對定量技術,對香蕉樣品葉片中的CMV和BBTV進行了準確的定量,確定CMV和BBTV實時熒光定量PCR反應條件的合理性及檢測方法的可靠性;應用CMV和BBTV的單克隆抗體,建立了快速檢測田間樣品的組織免疫印跡技術（Tissue blot immunobiding assay,TBIA）;明確了巴西蕉不同部位及不同季節(jié)CMV和BBTV的相對含量變化,結果如下:1、依據(jù)CMV... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮寫詞及英漢對照
1 前言
    1.1 香蕉病毒病害的概況
    1.2 香蕉CMV和BBTV兩種病毒的生理學特征及病理學特性
        1.2.1 黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）
        1.2.2 香蕉束頂病毒（Banana bunchy top virus，BBTV）
    1.3 分子生物學檢測
        1.3.1 實時熒光定量PCR技術
        1.3.2 環(huán)介導等溫擴增技術
    1.4 血清學檢測技術
    1.5 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及抗血清
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 主要試劑的配制
        2.1.6 數(shù)據(jù)分析
    2.2 實驗方法
        2.2.1 RNA提取用具的處理
        2.2.2 感染CMV病毒的香蕉葉片總RNA的抽提
        2.2.3 感染BBTV病毒的香蕉葉片總DN A的抽提
        2.2.4 實時熒光定量PCR標準曲線的制作
        2.2.5 病毒CMV和BBTV的實時熒光定量
        2.2.6 LAMP（RT-LAMP）檢測
        2.2.7 組織免疫印跡檢測
        2.2.8 間接ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測
3 結果與分析
    3.1 香蕉葉片總DNA及RN A的抽提
    3.2 香蕉葉片CMV和BBTV含量的檢測
        3.2.1 CMV和BBTV標準曲線標準品的制備
        3.2.2 實時熒光定量PCR檢測體系的建立
        3.2.3 三個香蕉樣品葉片的CMV含量分析
        3.2.4 香蕉葉片的BBTV含量分析
    3.3 TBIA法和LAMP法檢測香蕉病株的靈敏度分析
        3.3.1 TBIA法一抗、二抗最適稀釋度選擇
        3.3.2 比較TBIA法和RT- LAMP法檢測香蕉CMV病株的靈敏度
        3.3.3 比較TBIA法和LAMP法檢測香蕉BBTV病株的靈敏度
    3.4 TBIA法檢測香蕉病株的穩(wěn)定性分析
        3.4.1 TBIA法檢測香蕉CMV病株的穩(wěn)定性分析
        3.4.2 TBIA法檢測香蕉BBTV病株的穩(wěn)定性分析
    3.5TBIA法、LAMP法和PCR/RT-PCR法田間樣品檢測效果評價
        3.5.1 比較TBIA法、RT- LAMP和RT-PCR法檢測CMV病株
        3.5.2 比較TBIA法、LAMP法和PCR/RT-PCR法檢測BBTV病株
    3.6 香蕉CMV和BBTV含量的變化
        3.6.1 香蕉不同部位CMV和BBTV的相對含量變化
        3.6.2 香蕉不同季節(jié)CMV和BBTV病毒的相對含量變化
4 討論與結論
    4.1 討論
        4.1.1 香蕉葉片CMV和BBTV實時熒光定量PC R定量分析
        4.1.2 CMV和BBTV檢測方法的研究
        4.1.3 巴西蕉CMV和BBTV相對含量的變化分析
    4.2 結論
致謝
參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]海南香蕉病毒病害調查及檢測[J]. 王達新,馬蔚紅,殷曉敏,郭剛.  南方農業(yè)學報. 2014(02)
[2]以梅花鹿P21基因為模板比較相對和絕對熒光定量PCR的準確性[J]. 王大濤,郭倩倩,朱宏偉,劉振,王桂武,李春義.  特產研究. 2013(04)
[3]香蕉病毒病發(fā)生和防控[J]. 饒雪琴,孫潔,周翎,李華平.  中國果業(yè)信息. 2013(10)
[4]逆轉錄環(huán)介導等溫擴增技術檢測花生條紋病毒[J]. 謝宏峰,遲玉成,許曼琳,樊堂群,張建建,吳菊香,許婷婷.  植物病理學報. 2011(06)
[5]香蕉束頂病毒研究新進展[J]. 余乃通,劉志昕.  微生物學通報. 2011(03)
[6]基因芯片技術檢測黃瓜花葉病毒、煙草花葉病毒和馬鈴薯Y病毒[J]. 賈慧,王艷輝,王進忠,王升啟,董金皋.  華北農學報. 2011(01)
[7]RT-LAMP技術檢測菜豆莢斑駁病毒的研究[J]. 聞偉剛,楊翠云,崔俊霞,張穎.  植物保護. 2010(06)
[8]實時熒光定量PCR技術原理與應用[J]. 周曉麗,朱國坡,李雪華,王艷玲,劉興友.  中國畜牧獸醫(yī). 2010(02)
[9]香蕉束頂病毒�？诜蛛x物基因組的克隆及序列分析[J]. 馮團誠,王健華,劉志昕.  植物病理學報. 2010(01)
[10]單抗免疫斑點法和組織印跡法檢測侵染蝴蝶蘭的建蘭花葉病毒[J]. 董曉輝,孟春梅,黎軍英,吳建祥,榮松,張超,洪健.  微生物學通報. 2009(10)

碩士論文
[1]香蕉束頂病毒DNA組分啟動子的研究及香蕉條斑病毒的初步鑒定[D]. 莊軍.華南熱帶農業(yè)大學 2005



本文編號：3665791