桿狀病毒是發(fā)現(xiàn)最早、研究最多且實用意義很大的昆蟲病毒。其中家蠶核型多角體病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,簡寫B(tài)mNPV）是家蠶主要病害-血液型膿病的主要病原,每年給蠶桑業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。由于對于BmNPV侵染增殖機制研究并不深入,迄今為止對于其感染家蠶導(dǎo)致的核型多角體病仍無有效控制的方法。雖然桿狀病毒大多數(shù)基因的功能已經(jīng)被闡明,然而仍有部分基因在病毒生活史中的作用未知,這嚴(yán)重制約了對該病毒感染分子機制的深入了解。本研究以BmNPV兩個保守基因但功能仍然未知的基因,bm55a和bm109,作為研究對象,對其轉(zhuǎn)錄、表達以及亞細胞定位與病毒結(jié)構(gòu)定位進行了系統(tǒng)研究,進一步利用Bac-to-Bac系統(tǒng)和Red同源重組系統(tǒng),構(gòu)建了基因缺失的重組病毒,闡明了它們在病毒生活史中所起的生物學(xué)功能。主要結(jié)論如下:1.BmNPV b58a基因的研究。bm58a基因位于BmNPV基因組nt 56,183-nt 56,310處,全長183 bp,編碼60個氨基酸。RT-PCR分析表明,病毒感染后24h可檢測到其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,蛋白印跡結(jié)果顯示病毒感染后24h可檢測到Bm58... 

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略表
第一章 文獻綜述
    1.1 桿狀病毒研究概論
        1.1.1 桿狀病毒簡介
        1.1.2 桿狀病毒的分類
        1.1.3 桿狀病毒的基因組特征
        1.1.4 桿狀病毒的結(jié)構(gòu)特征
        1.1.5 桿狀病毒的生活史
    1.2 桿狀病毒的分子生物學(xué)研究
        1.2.1 桿狀病毒的RNA轉(zhuǎn)錄及DNA復(fù)制相關(guān)基因
        1.2.2 桿狀病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白基因
        1.2.3 桿狀病毒感染后期擴散相關(guān)基因
    1.3 A-RED重組系統(tǒng)概述
    1.4 研究目的與意義
第二章 家蠶核型多角體病毒bm58α的研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 病毒,細胞和昆蟲
        2.1.2 試劑與儀器
        2.1.3 實驗方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 bm58α生物信息學(xué)分析
        2.2.2 bm58α的轉(zhuǎn)錄時相分析
        2.2.3 重組病毒的構(gòu)建
        2.2.4 對重組病毒vBm~(bm-58a-KO-PH-GFP),vBm~(bm-58aHA-REP-PH-GFP)和vBm~(PH-GFP)在BmN細胞中的復(fù)制分析
        2.2.5 重組病毒vBm~(bm-58a-KO-PH-GFP),vBm~(bm-58aHA-REP-PH-GFP)和vBm~(PH-GFP)感染導(dǎo)致的細胞病變效應(yīng)
        2.2.6 Bm58a的表達時相分析
        2.2.7 重組病毒轉(zhuǎn)染細胞的電鏡觀察
        2.2.8 Bm58a的亞細胞定位
        2.2.9 重組病毒感染家蠶的生物學(xué)分析
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 家蠶核型多角體病毒bm109的研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒,細胞和昆蟲
        3.1.2 試劑與儀器
        3.1.3 實驗方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 bm109生物信息學(xué)分析
        3.2.2 bm109的轉(zhuǎn)錄時相分析
        3.2.3 重組病毒的構(gòu)建
        3.2.4 對重組病毒vBm~(bm-109-KO-PH-GFP),vBm~(bm-109HA-REP-PH-GFP)和vBm~(PH-GFP)在BmN細胞中的復(fù)制分析
        3.2.5 病毒基因組DNA復(fù)制的分析
        3.2.6 Bm109的表達時相分析及亞細胞定位
        3.2.7 Bm109在病毒粒子結(jié)構(gòu)組分中的定位
        3.2.8 重組病毒轉(zhuǎn)染細胞的電鏡觀察
        3.2.9 bm109的缺失對病毒基因表達的影響
        3.2.10 Bm109不同的片段的截短對病毒的影響
        3.2.11 酵母雙雜交驗證Bm109與病毒結(jié)構(gòu)蛋白的相互作用
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
研究總結(jié)與工作展望
參考文獻
附圖 (實驗載體圖譜)
致謝
博士期間發(fā)表論文目錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]原核微生物基因敲除策略的研究進展[J]. 陽燕,楊英明,胡濤.  國際口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2016(05)
[2]構(gòu)建重組桿狀病毒的幾種新方法[J]. 施先宗，陳曲侯.  生物化學(xué)與生物物理進展. 1995(02)

博士論文
[1]苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒（AcMNPV）odv-e25的分子生物學(xué)[D]. 陳琳.浙江大學(xué) 2013
[2]基于轉(zhuǎn)基因工程的家蠶核型多角體病毒（BmNPV）抗性素材創(chuàng)新及抗性機制研究[D]. 蔣亮.西南大學(xué) 2013

碩士論文
[1]BmNPV感染對家蠶幼蟲中腸圍食膜的影響[D]. 劉博.西南大學(xué) 2012



本文編號：3660230