在本研究中,我們克隆了1567bp的BmSpatzle4（BmSpz4）cDNA,其中包含一個(gè)完整的1386 bp開(kāi)放閱讀框,編碼461個(gè)氨基酸,克隆所得序列其ORF比家蠶基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中預(yù)測(cè)的BmSpz4（BGIBMGA008841-TA）的ORF長(zhǎng)108 bp,在5’端多編碼36個(gè)氨基酸,其前19個(gè)氨基酸為信號(hào)肽。信號(hào)肽是一種存在于大部分的新合成的蛋白質(zhì)的N端的短肽,信號(hào)肽引導(dǎo)新合成的蛋白質(zhì)向分泌通路轉(zhuǎn)移,在分泌蛋白質(zhì)的過(guò)程中起著非常重要的作用。BmSpz4基因位于3號(hào)染色體的Bm_scaf174上,在基因組中只有1個(gè)拷貝。BmSpz4基因共有6個(gè)外顯子、5個(gè)內(nèi)含子,BmSpz4包含了一個(gè)Spatzle域。ExPASy預(yù)測(cè)BmSpz4蛋白的分子量為53.19 kDa,等電點(diǎn)為5.56。ProtScale氨基酸序列的疏水性分析表明,BmSpz4蛋白的最大疏水性為3.333,最小值為-3.011,蛋白質(zhì)序列的疏水和親水區(qū)交錯(cuò)。BmSpz4的氨基酸序列與岡比亞按蚊、大蜜蜂、果蠅、麗蠅蛹集金小蜂、赤擬谷盜Spz有著較近的親緣關(guān)系。從初步的研究結(jié)果判斷BmSpz4存在著兩種... 

【文章來(lái)源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀
        1.2.1 物理防御
        1.2.2 免疫識(shí)別
        1.2.3 細(xì)胞免疫
        1.2.4 體液免疫
    1.3 研究?jī)?nèi)容
    1.4 研究意義
第2章 家蠶BmSpz4基因的克隆及序列分析
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 引物設(shè)計(jì)
        2.2.3 提取家蠶表皮總RNA
        2.2.4 反轉(zhuǎn)錄PCR
        2.2.5 瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.6 PCR產(chǎn)物切膠回收
        2.2.7 目的片段與pMD18-T載體的連接
        2.2.8 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 抽提重組質(zhì)粒DNA
        2.2.10 重組質(zhì)粒DNA的酶切鑒定
        2.2.11 BmSpz4生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 BmSpz4基因的克隆及測(cè)序
        2.3.2 信號(hào)肽
        2.3.3 選擇性剪接
        2.3.4 系統(tǒng)發(fā)育分析
    2.4 本章小結(jié)與討論
第3章 家蠶BmSpz4基因在組織中的表達(dá)情況
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 引物設(shè)計(jì)
        3.2.3 提取家蠶各組織總RNA
        3.2.4 半定量反轉(zhuǎn)錄PCR
        3.2.5 瓊脂糖凝膠電泳
    3.3 結(jié)果與分析
    3.4 本章小結(jié)與討論
第4章 BmSpz4基因經(jīng)不同微生物誘導(dǎo)后的表達(dá)情況
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 引物設(shè)計(jì)
        4.2.3 注射微生物
        4.2.4 提取家蠶體壁總RNA
        4.2.5 半定量反轉(zhuǎn)錄PCR
        4.2.6 瓊脂糖凝膠電泳
    4.3 結(jié)果與分析
    4.4 本章小結(jié)與討論
第5章 對(duì)BmSpz4基因進(jìn)行RNA干擾后抗菌肽的表達(dá)情況
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.2 引物設(shè)計(jì)
        5.2.3 制備雙鏈RNA
        5.2.4 注射 dsRNA
        5.2.5 提取總RNA
        5.2.6 半定量反轉(zhuǎn)錄PCR
        5.2.7 瓊脂糖凝膠電泳
    5.3 結(jié)果與分析
    5.4 本章小結(jié)與討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表及待發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3632213