昆蟲(chóng)生殖對(duì)于其種群繁衍至關(guān)重要。目前有關(guān)昆蟲(chóng)生殖發(fā)育的研究主要集中于轉(zhuǎn)錄水平關(guān)鍵調(diào)控基因的鑒定和功能研究。micro RNA（miRNA）是一類(lèi)重要的小分子非編碼RNA,以轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的方式調(diào)節(jié)基因表達(dá)。已有研究表明miRNA在昆蟲(chóng)生殖發(fā)育中發(fā)揮了重要作用,但是,這些研究主要集中在果蠅和蚊子等模式物種上。桔小實(shí)蠅Bactrocera dorsalis是一種高度入侵性害蟲(chóng)。因此,鑒定桔小實(shí)蠅中參與生殖發(fā)育的miRNA不僅可以豐富和完善昆蟲(chóng)生殖調(diào)控機(jī)制,而且為桔小實(shí)蠅綠色可持續(xù)治理提供了新靶標(biāo)和新思路。本研究首先建立了桔小實(shí)蠅雌成蟲(chóng)脂肪體和卵巢組織不同生殖發(fā)育階段的小RNA文庫(kù),從不同時(shí)期差異表達(dá)miRNAs中選取高豐度表達(dá)的3個(gè)已知miRNA,q PCR檢測(cè)了其在雌成蟲(chóng)脂肪體和卵巢組織不同生殖發(fā)育階段的表達(dá)模式;選取卵巢和脂肪體組織顯著高表達(dá)且在不同生殖發(fā)育時(shí)期差異表達(dá)的miR-286,通過(guò)顯微注射miRNA抑制劑檢測(cè)了其在卵巢發(fā)育、繁殖力中的功能;通過(guò)靶基因預(yù)測(cè)、雙熒光素酶驗(yàn)證、RNAi、拯救實(shí)驗(yàn)等研究明確其調(diào)控桔小實(shí)蠅雌成蟲(chóng)生殖發(fā)育的分子機(jī)理。1.桔小實(shí)蠅不同生殖發(fā)育階段差異表達(dá)miR... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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桔小實(shí)蠅不同生殖發(fā)育階段的卵巢形態(tài)

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文20圖2.2小RNA文庫(kù)測(cè)序和注釋?zhuān)ˋ）每種類(lèi)型miRNA的sRNA的百分比;（B）小RNA文庫(kù)的長(zhǎng)度分布和頻率百分比。Figure2.2SmallRNAlibrarysequencingandannotation.(A)AnnotationofsmallRNAs.ThepercentagesofeachtypeofsRNAsareindicatedinbrackets.(B)LengthdistributionandfrequencypercentageofmiRNAclassesineightlibraries.2.2.2桔小實(shí)蠅小RNA文庫(kù)特征分析利用miRBase軟件(ftp://mirbase.org/pub/mirbase/CURRENT/)進(jìn)行基于同源性的搜索進(jìn)而鑒定miRNA，在其中發(fā)現(xiàn)了物種保守的miRNA，并借助基因組信息預(yù)測(cè)了新的miRNA�？偣茶b定出933個(gè)miRNAs，其中卵巢和脂肪體內(nèi)物種保守的miRNA分別有274和262個(gè)，新的未命名的分別為225和172個(gè)�；趯�(duì)檢測(cè)到的miRNAs的分析，我們進(jìn)一步在桔小實(shí)蠅中進(jìn)行了miRNAs的保守性分析，并根據(jù)其他物種中報(bào)道的miRNA發(fā)生頻率對(duì)miRNA保守性進(jìn)行了計(jì)數(shù)。結(jié)果表明，桔小實(shí)蠅中的pre-miRNA數(shù)量接近80，其保守性和進(jìn)化僅次于大果蠅Drosophilavirilis,黑腹果蠅Drosophilamelanogaster和擬暗果蠅Drosophilapseudoobscura（圖2.3）。另外，所有差異表達(dá)的miRNA在第一個(gè)核苷酸位置顯示出尿嘧啶(U)的顯性偏好（圖2.4A）。分析每個(gè)位置出現(xiàn)的四個(gè)核苷酸的百分比，發(fā)現(xiàn)腺嘌呤(A)最常出現(xiàn)

miR-286在桔小實(shí)蠅雌蟲(chóng)生殖發(fā)育中的功能研究21在第2、5、7、11和18nt的位置，而U最經(jīng)常出現(xiàn)在第1、22、23、24、25和第26nt的位置（圖2.4B）。圖2.3miRNA保守性圖譜物種標(biāo)記為橫坐標(biāo)，miRNA的出現(xiàn)頻率標(biāo)為縱坐標(biāo)Figure2.3ConservationprofileoftheidentifiedmiRNAs.SpeciesaremarkedasabscissaandthefrequencyofoccurrenceofmiRNAsarelabeledastheordinate.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]桔小實(shí)蠅的國(guó)內(nèi)研究進(jìn)展[J]. 郭騰達(dá),宮慶濤,葉保華,武海斌,孫瑞紅.  落葉果樹(shù). 2019(01)
[2]桔小實(shí)蠅在果蔬上的發(fā)生規(guī)律及其防治方法[J]. 李燕,蔣巧根,朱江濤,翟秋紅.  上海農(nóng)業(yè)科技. 2018(01)
[3]生態(tài)因素對(duì)蛾類(lèi)昆蟲(chóng)交配與生殖的影響[J]. 駱丹,徐川峰,殷立新,張?jiān)娬Z(yǔ),劉興平.  環(huán)境昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2017(04)
[4]變溫對(duì)昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖影響的研究進(jìn)展[J]. 潘飛,陳綿才,肖彤斌,吉訓(xùn)聰,謝圣華.  環(huán)境昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2014(02)
[5]桔小實(shí)蠅卵巢形態(tài)結(jié)構(gòu)及發(fā)育特征研究[J]. 陳敏,陳鵬,葉輝,季清娥,黎劍平.  環(huán)境昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2014(01)
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[8]桔小實(shí)蠅生物學(xué)特點(diǎn)及其防治研究概述[J]. 謝琦,張潤(rùn)杰.  生態(tài)科學(xué). 2005(01)
[9]桔小實(shí)蠅國(guó)內(nèi)研究概況[J]. 梁光紅,陳家驊,楊建全,黃居昌,季清娥.  華東昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2003(02)
[10]昆蟲(chóng)生殖的一些基本特征[J]. 郭郛.  昆蟲(chóng)知識(shí). 1979(03)

博士論文
[1]桔小實(shí)蠅piRNA通路相關(guān)基因tudor及海藻糖酶基因?qū)β殉舶l(fā)育影響的研究[D]. 謝逸菲.西南大學(xué) 2015

碩士論文
[1]BdRab40在桔小實(shí)蠅20E和Insulin信號(hào)通路中的功能研究[D]. 吳方玉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3588760