發(fā)布時間：2022-01-11 03:56

　　真菌細胞壁涉及細胞附著,形態(tài)建成等多種生理功能。細胞壁在病原性真菌的抗逆及侵染致病過程中發(fā)揮著非常重要的作用。熒光增白劑高度敏感蛋白cwh具有維持細胞壁完整性的功能,這一現(xiàn)象僅在釀酒酵母中有報道,在致病真菌中尚無該類基因的研究和報道。昆蟲病原真菌具有獨特的體壁侵染方式,細胞壁在病原性真菌的抗逆及侵染致病過程中發(fā)揮著十分重要的作用。本研究以蝗綠僵菌（Metarhizium acridum）為實驗材料,通過同源重組的方法構建該基因的敲除及回復菌株對該基因進行功能研究。獲得了以下實驗結果:1.Macwh1和Macwh2生物信息學分析根據(jù)蝗綠僵菌基因組序列設計引物,克隆得到Macwh1和Macwh2基因,生物信息學分析表明Macwh1與Macwh2編碼的氨基酸序列無同源性。其中Macwh1登錄號為XP₀07815818,編碼957個氨基酸,等電點為7.02,蛋白質分子量為107.02KDa,基因組含7個內(nèi)含子。Macwh2登錄號為XP₀07808921,編碼的氨基酸133個,等電點為9.48,蛋白質分子量為13.85KDa,基因組含2個內(nèi)含子。2.M... 

【文章來源】：重慶大學重慶市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Macwh1、Macwh2的生物信息學分析

28LCWH1F/PtR2與RCWH1R/BaF2為引物，PCR擴增后分別得到約1200bp、1100bp的條帶（圖2.2 b），證明Macwh1左右臂成功連接在Bar基因的兩側。在構建回復載體時，先對Macwh1全長序列進行克隆，再連接于帶有Sur篩選標記的載體中完成回復載體的構建（圖2.2 a）。以農(nóng)桿菌介導轉化蝗綠僵菌，獲得Macwh1的敲出轉化子，利用選擇培養(yǎng)基對轉化子進行初步篩選，然后進行Southern blot驗證。在野生型中檢測得到一條約4000 bp的條帶，在敲除突變體中，由于Bar基因成功替代了含有BglII酶切位點的那段序列，得到約2600 bp的條帶

同理，以同源重組的原理在抗性篩選標記基因Sur基因的上下游分別連接上Macwh2基因的左右臂，完成敲除載體的構建（圖2.3 a）。分別以LCWH2F/Sur-R與RCWH2R/Sur-F為引物， PCR驗證后電泳檢測得到約1100bp、1200bp的條帶（圖2.3 b），證明Macwh1左右臂成功連接在Sur基因的兩側。在構建回復載體中，先對Macwh2全長序列進行克隆，再連接于帶有Bar基因篩選標記的載體中完成回復載體的構建（圖2.3 a）。通過農(nóng)桿菌介導轉化蝗綠僵菌，再利用選擇培養(yǎng)基對轉化子進行初步篩選，然后進行Southern blot驗證，在野生型中檢測得到一條約2000 bp的條帶


本文編號：3582039