發(fā)布時(shí)間：2021-11-07 15:22

　　夜蛾科（Noctuidae）害蟲(chóng)種類(lèi)多且危害廣,發(fā)生周期長(zhǎng),給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)極大損失。目前夜蛾科害蟲(chóng)的治理仍以化學(xué)防治為主,化學(xué)農(nóng)藥長(zhǎng)期大量施用造成的“3R”問(wèn)題,使生態(tài)環(huán)境日趨惡化,也使得有害生物的綠色防控成為眾望所歸。蘇云金桿菌（Bacillus thuringiensis,簡(jiǎn)稱Bt）以其殺蟲(chóng)專一性強(qiáng)、環(huán)境友好等特點(diǎn),在害蟲(chóng)生物防治中得到大量應(yīng)用,但隨著B(niǎo)t大面積的推廣應(yīng)用,田間抗性種群也不斷產(chǎn)生,因此,不斷挖掘新的Bt菌株,篩選出高效、廣譜的cry基因尤為重要。本研究利用醋酸鈉選擇篩選法從黑龍江省不同類(lèi)型的土壤中分離出蘇云金桿菌,并對(duì)其基因型進(jìn)行了鑒定,以棉鈴蟲(chóng)（Helicoverpa armigera Hubner）、甘藍(lán)夜蛾（Mamestra brassicae Linnaeus）、斜紋夜蛾（Spodoptera litura）為靶標(biāo),檢測(cè)了菌株對(duì)夜蛾科害蟲(chóng)的生物活性,并對(duì)高毒力菌株的新基因進(jìn)行了克隆與表達(dá),獲得以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果:從黑龍江省不同地區(qū)采集的352土樣中分離出Bt菌株46株,出菌率為13.6%,其中哈爾濱等地區(qū)的黑土與伊春等地區(qū)的暗棕壤分離出來(lái)的Bt菌株最多,出菌率分別... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Cry蛋白進(jìn)化樹(shù)劃分的3個(gè)區(qū)域Figure1-1ThreeDomainDendrogramtree1.5.2Bt的cry基因型鑒定方法

前 言in I, domain II, and domain III are shown in red, green, and blue, respectively圖 1-2 Cry 蛋白的晶體結(jié)構(gòu)Figure 1-2 Crystal structure of Cry Protein

圖 2-1 pET 28a（+）表達(dá)載體圖譜Figure 2-1 pET 28a（+）expression vector map的制備及目的基因的誘導(dǎo)表達(dá)的制備挑取 Bt 單菌落接種于 5 mL 液體 LB 培養(yǎng)基內(nèi)，30絕大部分晶體脫落，取 500 μL 菌液至 EP 管內(nèi)，冰=0.5 sec）。取 100 μL 菌液加入 50 μL 3×上樣 buffen 離心 1 min，取上清液待用。的誘導(dǎo)表達(dá)100 接種于含 34 μg/mL 氯霉素的 5 mL 液體 LB 培OD600=0.5-0.6，加入 50 μL 終濃度為 0.5 mmol/L 的 IP rpm 誘導(dǎo) 4 h，以未加 IPTG 誘導(dǎo)劑的作為陰性對(duì)照 500 μL PBS（pH 7.4）緩沖液懸浮，超聲破碎 6 m吸取上清和沉淀，沉淀用 500 μL 包涵體溶解液（Cl，pH 8.0）溶解。分別取 100 μL 樣品和 50 μL 3×pr

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]棉鈴蟲(chóng)防治技術(shù)[J]. 牛曉麗.  現(xiàn)代農(nóng)村科技. 2016(09)
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[9]轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉花基因類(lèi)型及原理研究進(jìn)展[J]. 孫璇,馬燕斌,張樹(shù)偉,段超,王新勝,李燕娥.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(01)
[10]煙草夜蛾科類(lèi)害蟲(chóng)發(fā)生特點(diǎn)和防治技術(shù)[J]. 李石力,李志偉,何孝兵,丁偉.  植物醫(yī)生. 2015(06)

博士論文
[1]四川生態(tài)區(qū)蘇云金芽胞桿菌資源的篩選鑒定及其新型殺蟲(chóng)基因的克隆表達(dá)研究[D]. 譚芙蓉.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008

碩士論文
[1]不同地區(qū)蘇云金芽胞桿菌vip3Aa基因的鑒定及殺蟲(chóng)活性分析[D]. 李帥.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]棉鈴蟲(chóng)、甜菜夜蛾中腸受體蛋白與Bt毒素結(jié)合能力的研究[D]. 袁向東.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[3]蘇云金芽胞桿菌的分離鑒定及高毒力菌株的研究[D]. 蘇俊平.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]四川蒙頂山蘇云金芽胞桿菌cry基因鑒定及其新型模式cry基因的克隆與表達(dá)[D]. 關(guān)鵬.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[5]蘇云金芽孢桿菌殺蟲(chóng)基因的鑒定、克隆與表達(dá)[D]. 董明.河北大學(xué) 2010
[6]雅安周公山蘇云金芽胞桿菌基因資源研究和殺蟲(chóng)基因的克隆[D]. 李云艷.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3482089