雙生病毒科病毒是一類具有孿生顆粒形態(tài)的植物單鏈DNA病毒,由煙粉虱或葉蟬為媒介進(jìn)行傳播,寄主范圍十分廣泛,在熱帶和亞熱帶地區(qū)對多種作物造成毀滅性危害。近年來雙生病毒在我國的危害范圍不斷擴(kuò)大,云南、重慶、海南、廣西、山東等多個省份均已發(fā)現(xiàn)其侵染,因此對雙生病毒的早期檢測也變得越來越重要。為了進(jìn)一步確定雙生病毒在我國的傳播、分布和發(fā)生規(guī)律,本論文對從湖南地區(qū)采集到的6例和海南采集到的1例疑似雙生病毒侵染的樣品進(jìn)行了檢測和分子鑒定。2016年,我們在湖南省發(fā)現(xiàn)洋姜、番茄、蘿卜、賽葵、甘薯和牽牛花等6種植物表現(xiàn)卷葉、葉片發(fā)黃、矮化等疑似雙生病毒侵染的癥狀。隨后從采集到的葉片樣品中分別提取總DNA,并以其為模板進(jìn)行了RCA（Rolling cycle amplification,RCA）擴(kuò)增,基于RCA-PCR技術(shù),在未知病毒序列的情況下,通過酶切RCA產(chǎn)物得到了部分病毒基因組片段。根據(jù)測得的部分序列,我們設(shè)計特異引物去擴(kuò)增分離物的DNA-A序列全長。在GenBank數(shù)據(jù)庫,將得到的全長核苷酸序列分別進(jìn)行BLAST同源性檢索,結(jié)果表明,番茄和牽�；ň浑p生病毒侵染:番茄樣品分離物的DNA-A組份... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

滾環(huán)擴(kuò)增過程圖（引自Reaginetal.,2003）

5圖 1.2：雙生病毒科九個屬的基因組結(jié)構(gòu)圖（引自 Varsani et al., 2017）igure 1.2: Genome organizations of nine genera within family Geminiviridae.(cited from Varsani et al., 2017)玉米線條病毒屬（Mastrevirus）病毒其基因組一般是單組份病毒，大小約為 2.6-2.8 kb，玉米病毒（Maize streak virus, MSV）為其代表種，含有 4 個 OFRs，其病毒鏈和互補(bǔ)鏈各自具有 ORFs，其中病毒鏈含有 Vl 和 V2 兩個開放閱讀框,分別編碼外殼蛋白（Coat protein, CP）和蛋白（Movement protein, MP），互補(bǔ)鏈含有兩個開放閱讀框 C1 和 C2，分別編碼復(fù)制相關(guān) A（Replication associated protein A, RepA）和復(fù)制相關(guān)蛋白（Replication associated protein,。病毒鏈和互補(bǔ)鏈上含有大小不同的兩個基因間隔區(qū)，即 LIR（Large intergenic region）和

第二章 湖南省番茄和牽�；ㄉ系碾p生病毒分子鑒定近些年，雙生病毒在中國的危害日益加重，傳播速度越來越快，侵染范圍也不斷擴(kuò)大。在，我國并未在湖南省發(fā)現(xiàn)過雙生病毒，為了明確其在中國的發(fā)生分布，本研究基于 RCA-P，對從湖南采集到的番茄和牽牛花樣品進(jìn)行了病原分子鑒定，通過擴(kuò)增得到了樣品分離物序列全長，這為更好地完善對該病害的防控防治工作，提供了一定的科學(xué)依據(jù)。 材料和儀器.1 材料2016 年 10 月在湖南省長沙市采集到番茄、牽牛花、甘薯、蘿卜、洋姜和賽葵樣品（圖 2.1番茄和牽�；ň哂须p生病毒侵染的植株矮化、葉片邊緣上卷，葉片增厚，黃化等典型癥狀證實(shí)是被雙生病毒侵染。陽性對照為本實(shí)驗室保存的番茄黃化曲葉病毒和甘薯曲葉病毒。AA CB

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]番茄黃化曲葉病毒病綜合防控技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 徐德利,楊靜,鮑繼友,謝玲,吳敏,鄭燕.  農(nóng)業(yè)科技通訊. 2014(09)
[2]甘薯卷葉病毒江蘇分離物基因組全長序列測定及其外殼蛋白基因在大腸桿菌中的表達(dá)[J]. 喬貞貞,秦艷紅,喬奇,張德勝,田雨婷,高潔,張振臣.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(04)
[3]河北魏縣番茄黃化曲葉病毒病的發(fā)生情況及其綜合防控措施[J]. 王書芳.  中國植保導(dǎo)刊. 2011(02)
[4]番茄黃化曲葉病毒病的發(fā)生分布及防治對策[J]. 宋建軍,劉紅宵,仇燕,田鵬.  北方園藝. 2010(07)
[5]番茄病毒病的癥狀、病原與藥劑防治[J]. 王愛武,皇甫自起.  長江蔬菜. 2010(03)
[6]我國番茄黃化曲葉病發(fā)生規(guī)律和研究進(jìn)展[J]. 李小靖,葉志彪.  長江蔬菜. 2010(02)
[7]淺談番茄黃曲葉病毒病[J]. 馮蘭香,謝丙炎,楊宇紅.  中國蔬菜. 2009(05)
[8]滾環(huán)DNA擴(kuò)增的原理、應(yīng)用和展望[J]. 肖樂義,祁自柏,姜俊,張子寬.  中國生物工程雜志. 2004(09)
[9]雙生病毒——一類值得重視的植物病毒[J]. 周雪平,崔曉峰,陶小榮.  植物病理學(xué)報. 2003(06)
[10]粉虱傳雙生病毒的TAS-ELISA及PCR快速檢測[J]. 謝艷,張仲凱,李正和,丁銘,周雪平.  植物病理學(xué)報. 2002(02)

博士論文
[1]雙生病毒DNAβ分子βC1基因的功能研究[D]. 崔曉峰.浙江大學(xué) 2004

碩士論文
[1]�；ㄈ~型萎縮病病原的鑒定[D]. 馬宇欣.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015



本文編號：3457780