由疫霉菌（Phytophthora spp.）造成的作物疫病是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的毀滅性病害,嚴(yán)重威脅著全球的生態(tài)和糧食安全,給世界經(jīng)濟(jì)造成了巨大的損失。由于疫霉菌與植物病原真菌在遺傳學(xué)上的巨大差異,多數(shù)殺菌劑對(duì)之無(wú)效,目前尚無(wú)高效的防治手段。近年來(lái)隨著轉(zhuǎn)基因育種技術(shù)的發(fā)展,培育轉(zhuǎn)基因抗性品種可為現(xiàn)階段防治作物疫病、保障農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全提供一種有效方案。已知植物病原細(xì)菌的核調(diào)控蛋白（nucleomodulins）可進(jìn)入寄主的細(xì)胞核、調(diào)控植物防衛(wèi)相關(guān)基因的表達(dá),是一類(lèi)非常重要的致病相關(guān)蛋白,但在卵菌中尚無(wú)系統(tǒng)研究。鑒于此,本文首次在辣椒疫霉（P.capsici）中開(kāi)展了以下研究:（1）為了探究這類(lèi)效應(yīng)蛋白的分布,利用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)辣椒疫霉中具有DNA結(jié)合功能域的外泌蛋白。結(jié)果共獲得48個(gè)候選蛋白。（2）為了分析候選蛋白是否在辣椒疫霉的侵染過(guò)程中發(fā)揮作用,利用熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù),分析了這48個(gè)基因在辣椒疫霉生長(zhǎng)發(fā)育和侵染階段的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示,預(yù)測(cè)的大多數(shù)基因（70.83%）在侵染階段上調(diào)表達(dá),說(shuō)明這些效應(yīng)蛋白響應(yīng)了辣椒疫霉的侵染。（3）為進(jìn)一步明確候選蛋白在侵染過(guò)程中的作用,克隆了兩... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＴＡＬ效應(yīng)蛋白的結(jié)構(gòu)［５１］??ＴＡＬ效應(yīng)蛋白由三個(gè)典型區(qū)域組成：Ｎ端、中心重復(fù)區(qū)域（ＣＲＲ）和Ｃ端

?具有寄主核定位特征的辣椒疫霉效應(yīng)蛋白的預(yù)測(cè)、鑒定及應(yīng)用初探???：ｋ：Ｌ?秦?ＩＩ??ＨＤ?ＮＧ?Ｎｌ?ＮＳ?ＮＮ?Ｎ＊?ＨＧ?Ｈ＊?ＩＧ??＞?Ａ?１９?７?５５?２０?７?１?０?０?０??｜?ｃ?Ｃ?６９?１２?５?１０?２?７?２?０?０??＂３?５＂?Ｇ?０?０?０?４?７?０?０?０?０??ｃ?＾?Ｔ?５?５０?０?３?１?１?２?１?１??圖３?ＴＡＬ效應(yīng)蛋白的特異性靶向ＤＮＡ模型ｌ８〇ｌ??人工排列的誘導(dǎo)基因啟動(dòng)子中ＴＡＬ效應(yīng)蛋白和預(yù)測(cè)靶標(biāo)序列的ＲＶＤｓ，星號(hào)表示該重復(fù)類(lèi)型中缺少第十??三位氨基酸。每種ＲＶＤ出現(xiàn)頻率最高的堿基數(shù)目用粗體標(biāo)出??３．１．５?ＴＡＬ效應(yīng)蛋白的應(yīng)用??（ｌ）ＴＡＬＥＮ技術(shù)的產(chǎn)生與應(yīng)用??隨著ＴＡＬ效應(yīng)蛋白與靶標(biāo)基因的識(shí)別密碼被破解，以ＴＡＬ效應(yīng)蛋白為基礎(chǔ)的分子生??物學(xué)技術(shù)日益發(fā)展�；冢裕粒绦�(yīng)蛋白能夠特異性識(shí)別和結(jié)合目的ＤＮＡ序列的特點(diǎn)，對(duì)??其附加一個(gè)核酸酶就生成／?ＴＡＬＥＮｓ?（ＴＡＬ?ｅｆｆｅｃｔｏｒ?ｎｕｃｌｅａｓｅｓ）。根據(jù)識(shí)別密碼選擇合適的??ＴＡＬＥＮ打靶位點(diǎn)，人工組裝ＲＶＤｓ合成的ＴＡＬ效應(yīng)蛋白，可以精確結(jié)合到中．物瑤因組任??意指定位置。目前己開(kāi)發(fā)出多個(gè)ＴＡＬＥＮ打靶位點(diǎn)的設(shè)計(jì)軟件及網(wǎng)站，如ｌｉｔｔｐＳ：／／ｔａｌｅ－ｎｔ．??ｃａｃ．ｃｏｍｅｌｌ．ｅｄｕ／（設(shè)計(jì)?ＴＡＬＥＮ）、ｈｔｔｐ：／／ｚｉｆｉｔ．ｐａｒｔｎｅｒｓ．ｏｒｇ／ＺｉＦｉＴ／（設(shè)計(jì)?ＴＡＬＥＮ／ＴＡＬＥ）和??ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｔｏｏｌｓ／ｅｐｃｒ／（搜索?ＴＡＬＥＮ?脫祀位點(diǎn)）等【８７］�？紤]到?ＴＡＬ?效應(yīng)蛋白??與靶標(biāo)

?ＳＰ?ＺＯ?ＧＣ?Ｍｏｃｋ?１．５?：、?６?１：?２４?３６?７２?ｈｐｉ??二?ｉｓｉ?ｂｐ??Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?＾??ｂ?０３?ｊ?ｉ?：?ｉ??ｒ??３００??？：???：??????ｉ?２００?：???：?■／■■■＇■■???＼?＼??１００???Ｉ．???■??；?；?；??？??；?：?：?Ｔ７：?：??０?１０?２０?３０?＊０??Ｃｙｃｌｅｓ?Ｌｏｇ?Ｓｃａｌｅ??圖５辣椒疫霉生長(zhǎng)發(fā)育及侵染階段的總ＲＮＡ及其ｃＤＮＡ質(zhì)量分析??Ａ：不卜９階段的總ＲＮＡ樣品及內(nèi)參貓因?qū)Γ悖模危吝M(jìn)行擴(kuò)增的結(jié)災(zāi)。樣品：ＭＹ，蘭絲；ＳＰ，游動(dòng)孢子??囊；ＺＯ，游動(dòng)孢子；ＧＣ，萌發(fā)休止孢；１．５－７２ｈｐｉ，接種辣椒疫霉１．５、３、６、１２、２４、３６、７２?１ｉ／Ｔｉ＿的??本氏煙；Ｍｏｃｋ，接種無(wú)菌水的本氏煙。ｇＤＮＡ，辣椒疫霉基因組ＤＮＡ。Ｂ：抓７／基因跨內(nèi)含ｒ引物對(duì)??（ｃａｐＷＳ４１Ｆ２／ｃａｐＷＳ４１Ｒ２）對(duì)各樣品的熒光定Ｍ?ＰＣＲ擴(kuò)增曲線(xiàn)??２．２標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的分析??設(shè)置五個(gè)濃度梯度，依次將辣椒疫梅坫因組ＤＮＡ稀釋十倍，作為模板。利用４８?jìng)�(gè)候??選基因的引物進(jìn)行熒光定量ＰＣＲ擴(kuò)增，制作這些引物對(duì)的熒光定量ＰＣＲ標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。結(jié)張??顯示，各標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性系數(shù)爐均大于０．９８，斜率Ｋ的范圍在滿(mǎn)足－３．５ＳＫＳ－３的條件下，??引物對(duì)的擴(kuò)增效率Ｅ值均在９０°／。－１２０％的范圍內(nèi)（表３），表明所有熒光定量ＰＣ＇Ｒ引物對(duì)具??有較好的擴(kuò)增效率。此外，所有標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)應(yīng)的熔解曲線(xiàn)均為中．峰．１１．峠值對(duì)應(yīng)的溫度在??８０°Ｃ以上，比

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]辣椒疫霉效應(yīng)分子編碼基因的克隆及功能分析[D]. 邢玉平.揚(yáng)州大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3405739