瓜類蚜傳黃化病毒的檢測和侵染性克隆構(gòu)建
發(fā)布時間:2021-08-15 11:27
瓜類蚜傳黃化病毒(Cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV)屬于黃癥病毒科(Luteoviridae),馬鈴薯卷葉病毒屬(Polerovirus)。該病毒在歐洲和亞洲的主要瓜類種植區(qū)均有報道發(fā)生,流行范圍廣,大面積發(fā)生時造成嚴重的減產(chǎn)。目前CABYV已在我國多個省市發(fā)生,對西甜瓜等重要經(jīng)濟作物的安全生產(chǎn)造成極大的威脅。為了了解該病毒在我國的發(fā)生情況,我們對新疆鄯善、甘肅瓜洲和河南通許地區(qū)的瓜類作物進行了取樣調(diào)查。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(DAS-ELISA)法對常見的病毒進行病毒檢測,以期了解這三個地區(qū)的西瓜甜瓜病毒種類及分布,為當?shù)匚鞴虾吞鸸喜《静〉姆揽靥峁﹨⒖。結(jié)果表明:小西葫蘆黃花葉病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)的檢出率最高,為31.3%,其次為瓜類蚜傳黃化病毒(Cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV)和西瓜花葉病毒(Watermelon mosaic virus,WMV),檢出率分別為26.9%、26.1%,黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic...
【文章來源】:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁數(shù)】:54 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
CABYV基因組結(jié)構(gòu)
圖 1.2 CABYV 分布情況Figure 1.2 Distribution of CABYV寄主范圍、傳播介體及傳播方式類蚜傳黃化病毒首次發(fā)現(xiàn)時的寄主為甜瓜、黃瓜、小西葫蘆。隨后的鑒別寄主試驗 還能侵染藜科的甜菜(Beta vulgaris L.)、菊科的萵苣(Lactuca sativa L.)和歐洲千 vulgaris L.)、十字花科的薺菜(Capsella bursa-pastoris L.)和海甘藍(Crambe abyss)、罌粟科的虞美人(Papaver rhoeas L.)及馬齒莧科的冬季馬齒莧(Montia perfoliata .)(Lecoq,1992)。向海英等(2008)在 9 種葫蘆科作物上發(fā)現(xiàn) CABYV 的侵染,omordica charantia L.),、瓠瓜(Lagenaria siceraria (Molina) Standl.)、黃瓜(Cucumis sa瓜(Cucumis melo L.)、南瓜(Cucurbita moschata Duchesne)、西葫蘆(Cucurbita pepo L.) aegyptiaca P. Mill.)、西瓜 (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum. & Nakai)和冬瓜(Beni(Thunb.) Cogn.)。從種植過小西葫蘆的地里采集的雜草,包括歐洲千里光(Senecio vul菜(Capsella bursa-pastoris (Linn.) Medic.)及寶蓋草(Lamium amplexicaule L.)也BYV 的存在,這些雜草可能作為 CABYV 越冬的場所(Lecoq et al.,1992)。BYV 不能通過機械接種傳播,但能通過桃蚜(Myzus persicae)和棉蚜(Aphis gossy
圖 3.1 瓜類蚜傳黃化病毒(CABYV)典型癥狀及田間發(fā)生情況(甘肅省瓜州縣,2016.7)Figure 3.1 Typical symptom and occurrence of CABYV in the field of Guazhou, Gansu province,2016.7.3 試驗方法總 RNA 提取按照試劑盒的說明書進行,RT-PCR 按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書,PCR 產(chǎn)物的按照膠回收試劑盒說明書進行,膠回收片段與載體連接按照載體說明書進行。質(zhì)粒提取、感細胞制備、大腸桿菌轉(zhuǎn)化及菌液 PCR 等分子生物學(xué)技術(shù)參照分子克隆實驗指南(第 3 版)。.3.1 總 RNA 提取按照 RNA 提取試劑盒的說明書進行總 RNA 提取,將 RNA 于-80℃保存。.3.2 RT-PCR 擴增反轉(zhuǎn)錄以提取的總 RNA 為模板,按照說明書進行。A. 在 PCR 管中配制 RNA/引物混合液模板 RNA 4 μLRandom Primers(25μM) 1 μL
【參考文獻】:
期刊論文
[1]新疆哈密瓜病毒的DAS-ELISA檢測和分子鑒定[J]. 潘亞南,韓劍,吳海波,吉艷玲,王純利,劉芳,羅明,張祥林. 園藝學(xué)報. 2016(06)
[2]甘肅省河西地區(qū)瓜類作物病毒病的病原鑒定[J]. 文朝慧,南志標. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2013(12)
[3]南瓜蚜傳黃化病毒P0蛋白基因ihpRNA載體構(gòu)建及煙草轉(zhuǎn)化[J]. 齊洪華,李捷,馬萱,徐踐. 北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報. 2012(03)
[4]葫蘆科作物種傳病毒及其檢疫重要性[J]. 林石明,廖富榮,陳青,陳紅運. 植物檢疫. 2012(01)
[5]農(nóng)桿菌介導(dǎo)的CMV侵染性克隆及2b缺失突變體構(gòu)建[J]. 姚敏,張?zhí)炱?田志超,王源超,陶小榮. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(14)
[6]馬鈴薯卷葉病毒CP基因的突變及其原核表達[J]. 張建建,隋炯明,蓋樹鵬,宋希云,郭寶太. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2010(08)
[7]用酵母雙雜交篩選與南瓜蚜傳黃化病毒MP互作的寄主因子[J]. 陳小慧,費菲,向海英,韓成貴,程玉琴. 植物保護學(xué)報. 2010(04)
[8]葫蘆科作物3種主要病毒的多重RT-PCR方法的建立[J]. 趙麗,古勤生,陳紅運,史團省,田延平,胡京昂. 果樹學(xué)報. 2008(05)
[9]單克隆抗體在植物病毒學(xué)中的應(yīng)用[J]. 韓英,任艷玲,廖詠梅. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué). 2007(S1)
[10]馬鈴薯X病毒云南分離物單克隆抗體的制備及其檢測應(yīng)用[J]. 吳建祥,周雪平. 浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2005(05)
博士論文
[1]柑橘碎葉病毒侵染性克隆構(gòu)建及其誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)體系建立[D]. 宋震.西南大學(xué) 2013
[2]煙草脈帶花葉病毒侵染性克隆的構(gòu)建及其在交叉保護、外源蛋白表達及VIGS中的應(yīng)用[D]. 高瑞.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]小麥黃花葉病毒侵染性cDNA克隆及細胞侵染體系的建立[D]. 董家紅.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004
碩士論文
[1]大麥黃矮病毒GAV株系和小麥黃花葉病毒單克隆抗體的制備及其應(yīng)用[D]. 李娜.浙江大學(xué) 2015
[2]PVS和PLRV ELISA檢測試劑盒的研制與應(yīng)用[D]. 李婷婷.云南大學(xué) 2014
[3]番茄黃化曲葉病毒和黃瓜綠斑駁花葉病毒單克隆抗體的制備及其檢測應(yīng)用[D]. 尚海麗.浙江大學(xué) 2011
[4]葫蘆科植物病毒研究[D]. 陳潔云.浙江大學(xué) 2003
本文編號:3344462
【文章來源】:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁數(shù)】:54 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
CABYV基因組結(jié)構(gòu)
圖 1.2 CABYV 分布情況Figure 1.2 Distribution of CABYV寄主范圍、傳播介體及傳播方式類蚜傳黃化病毒首次發(fā)現(xiàn)時的寄主為甜瓜、黃瓜、小西葫蘆。隨后的鑒別寄主試驗 還能侵染藜科的甜菜(Beta vulgaris L.)、菊科的萵苣(Lactuca sativa L.)和歐洲千 vulgaris L.)、十字花科的薺菜(Capsella bursa-pastoris L.)和海甘藍(Crambe abyss)、罌粟科的虞美人(Papaver rhoeas L.)及馬齒莧科的冬季馬齒莧(Montia perfoliata .)(Lecoq,1992)。向海英等(2008)在 9 種葫蘆科作物上發(fā)現(xiàn) CABYV 的侵染,omordica charantia L.),、瓠瓜(Lagenaria siceraria (Molina) Standl.)、黃瓜(Cucumis sa瓜(Cucumis melo L.)、南瓜(Cucurbita moschata Duchesne)、西葫蘆(Cucurbita pepo L.) aegyptiaca P. Mill.)、西瓜 (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum. & Nakai)和冬瓜(Beni(Thunb.) Cogn.)。從種植過小西葫蘆的地里采集的雜草,包括歐洲千里光(Senecio vul菜(Capsella bursa-pastoris (Linn.) Medic.)及寶蓋草(Lamium amplexicaule L.)也BYV 的存在,這些雜草可能作為 CABYV 越冬的場所(Lecoq et al.,1992)。BYV 不能通過機械接種傳播,但能通過桃蚜(Myzus persicae)和棉蚜(Aphis gossy
圖 3.1 瓜類蚜傳黃化病毒(CABYV)典型癥狀及田間發(fā)生情況(甘肅省瓜州縣,2016.7)Figure 3.1 Typical symptom and occurrence of CABYV in the field of Guazhou, Gansu province,2016.7.3 試驗方法總 RNA 提取按照試劑盒的說明書進行,RT-PCR 按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書,PCR 產(chǎn)物的按照膠回收試劑盒說明書進行,膠回收片段與載體連接按照載體說明書進行。質(zhì)粒提取、感細胞制備、大腸桿菌轉(zhuǎn)化及菌液 PCR 等分子生物學(xué)技術(shù)參照分子克隆實驗指南(第 3 版)。.3.1 總 RNA 提取按照 RNA 提取試劑盒的說明書進行總 RNA 提取,將 RNA 于-80℃保存。.3.2 RT-PCR 擴增反轉(zhuǎn)錄以提取的總 RNA 為模板,按照說明書進行。A. 在 PCR 管中配制 RNA/引物混合液模板 RNA 4 μLRandom Primers(25μM) 1 μL
【參考文獻】:
期刊論文
[1]新疆哈密瓜病毒的DAS-ELISA檢測和分子鑒定[J]. 潘亞南,韓劍,吳海波,吉艷玲,王純利,劉芳,羅明,張祥林. 園藝學(xué)報. 2016(06)
[2]甘肅省河西地區(qū)瓜類作物病毒病的病原鑒定[J]. 文朝慧,南志標. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2013(12)
[3]南瓜蚜傳黃化病毒P0蛋白基因ihpRNA載體構(gòu)建及煙草轉(zhuǎn)化[J]. 齊洪華,李捷,馬萱,徐踐. 北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報. 2012(03)
[4]葫蘆科作物種傳病毒及其檢疫重要性[J]. 林石明,廖富榮,陳青,陳紅運. 植物檢疫. 2012(01)
[5]農(nóng)桿菌介導(dǎo)的CMV侵染性克隆及2b缺失突變體構(gòu)建[J]. 姚敏,張?zhí)炱?田志超,王源超,陶小榮. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(14)
[6]馬鈴薯卷葉病毒CP基因的突變及其原核表達[J]. 張建建,隋炯明,蓋樹鵬,宋希云,郭寶太. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2010(08)
[7]用酵母雙雜交篩選與南瓜蚜傳黃化病毒MP互作的寄主因子[J]. 陳小慧,費菲,向海英,韓成貴,程玉琴. 植物保護學(xué)報. 2010(04)
[8]葫蘆科作物3種主要病毒的多重RT-PCR方法的建立[J]. 趙麗,古勤生,陳紅運,史團省,田延平,胡京昂. 果樹學(xué)報. 2008(05)
[9]單克隆抗體在植物病毒學(xué)中的應(yīng)用[J]. 韓英,任艷玲,廖詠梅. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué). 2007(S1)
[10]馬鈴薯X病毒云南分離物單克隆抗體的制備及其檢測應(yīng)用[J]. 吳建祥,周雪平. 浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2005(05)
博士論文
[1]柑橘碎葉病毒侵染性克隆構(gòu)建及其誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)體系建立[D]. 宋震.西南大學(xué) 2013
[2]煙草脈帶花葉病毒侵染性克隆的構(gòu)建及其在交叉保護、外源蛋白表達及VIGS中的應(yīng)用[D]. 高瑞.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]小麥黃花葉病毒侵染性cDNA克隆及細胞侵染體系的建立[D]. 董家紅.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004
碩士論文
[1]大麥黃矮病毒GAV株系和小麥黃花葉病毒單克隆抗體的制備及其應(yīng)用[D]. 李娜.浙江大學(xué) 2015
[2]PVS和PLRV ELISA檢測試劑盒的研制與應(yīng)用[D]. 李婷婷.云南大學(xué) 2014
[3]番茄黃化曲葉病毒和黃瓜綠斑駁花葉病毒單克隆抗體的制備及其檢測應(yīng)用[D]. 尚海麗.浙江大學(xué) 2011
[4]葫蘆科植物病毒研究[D]. 陳潔云.浙江大學(xué) 2003
本文編號:3344462
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