近幾年,蘋果炭疽葉枯�。℅lomerella leaf spot,GLS）在我國(guó)蘋果產(chǎn)地迅速蔓延。果生刺盤孢（Colletotrichum fructicola）是該病害的的主要病原。田間條件下,果生刺盤孢在致病后期可以產(chǎn)生大量子囊孢子。子囊孢子能夠隨風(fēng)遠(yuǎn)距離傳播可能是蘋果炭疽葉枯病迅速蔓延的重要原因。交配型基因是調(diào)控真菌有性生殖的關(guān)鍵因子。大多數(shù)絲狀子囊真菌有性子實(shí)體發(fā)育和子囊孢子形成需要交配型基因MAT1-1-1和MAT1-2-1的互相識(shí)別。異宗配合真菌同一菌株僅含MAT1-1-1或MAT1-2-1,交配型基因不同的菌株間發(fā)生交配。同宗配合真菌同一菌株同時(shí)含有MAT1-1-1和MAT1-2-1,自身即可完成有性生殖。與其它子囊真菌不同,目前十幾個(gè)已知的刺盤孢屬真菌基因組中均只含有MAT1-2-1,而無MAT1-1-1,而且部分菌株仍能發(fā)生同宗配合。目前尚不清楚MAT1-2-1是否是刺盤孢真菌有性生殖的關(guān)鍵調(diào)控因子。果生刺盤孢1104-6-B菌株在固體培養(yǎng)基上產(chǎn)生大量散生不育子囊殼,該菌株與性親和菌株1104-7-W-S對(duì)峙培養(yǎng),則會(huì)形成由聚生可育子囊殼構(gòu)成的雜交線。本研究以1104... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

刺盤孢真菌獨(dú)特的交配型位點(diǎn)基因結(jié)構(gòu)

12果生刺盤孢交配型基因MAT1-2-1的功能分析GATGAGGTAG2.根據(jù)交配型MAT1-2-1基因及其上下游2000bp左右的序列，再結(jié)合潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因（hph）序列設(shè)計(jì)基因敲除載體構(gòu)建所用的PCR擴(kuò)增引物。引物序列見表2-1，圖2-1顯示引物的位置。表2-1交配型MAT1-2-1基因敲除和檢測(cè)所用引物Table.2-1DesignedprimersusedforgeneratinganddetectinggeneknockoutmutantsofthematingtypegeneMAT1-2-1引物名稱PrimerName引物序列Sequence(5’-3’)Mat1-2-1LFGGGAAATGATGGGGTTTCTAACTGCMat1-2-1LRAscIGCATTGGCGCGCCGGCGCAGACGTTGCTAGAATTATGGMat1-2-1RFNotIATAAGAATGCGGCCGCCGCTGTAGTATCAGTCATGGAACGGMat1-2-1RRCAGGAGAACAAGGCTGCAGTGCTAGMat1-2-1DFGTTGCTGTCTCTCAGAAGGATTACCMat1-2-1DRCAATAGCGATGCCGTTGACCGAGACMat1-2-1LFNestTGCATGGTTGCATGGAGACGTAAGCMat1-2-1RRNestTTGATCCCATCGAGACCAAAGAAGCXuHyRGTATTGACCGATTCCTTGCGGTCCGAAXuYgFGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTXu855RGCTGATCTGACCAGTTGCXu866FGTCGATGCGACGCAATCGT圖2-1PCR擴(kuò)增引物位置示意圖Fig.2-1Schematicrepresentationoftheprimerpositions

18果生刺盤孢交配型基因MAT1-2-1的功能分析5.于接種后的第六天，觀察發(fā)病狀況并記錄結(jié)果。2.3結(jié)果分析2.3.1果生刺盤孢ZW1104菌株MAT1-2-1蛋白序列的分析果生刺盤孢ZW1104菌株MAT1-2-1基因編碼區(qū)長(zhǎng)843bp，有兩個(gè)內(nèi)含子，外顯子含一個(gè)726bp開放閱讀框，編碼241個(gè)氨基酸（圖1）。編碼蛋白序列144至220位為MATA_HMG(highmobilitygroup)box結(jié)構(gòu)域（黃色區(qū)域），內(nèi)含13個(gè)保守的DNA結(jié)合位點(diǎn)（紅色），這些結(jié)構(gòu)特征與已知MAT1-2-1蛋白一致。對(duì)NCBI數(shù)據(jù)庫做BlastP比對(duì)，發(fā)現(xiàn)MAT1-2-1蛋白序列與果生刺盤孢M(jìn)AT1-2-1最為接近。圖2-1果生刺盤孢M(jìn)AT1-2-1基因編碼的預(yù)測(cè)蛋白序列。黃色區(qū)域?yàn)镸ATA_HMG(highmobilitygroup)box結(jié)構(gòu)域，紅色氨基酸為保守的DNA結(jié)合位點(diǎn)。Figure.2-1PredictedproteinsequenceencodedbytheColletotrichumfructicolaMAT1-2-1gene.MATA_HMG(highmobilitygroup)boxdomainishighlightedinyellowandtheconservedaminoacidsinvolvedinDNAbindingarehighlightedinred.將MAT1-2-1基因編碼的蛋白與其在果生刺盤孢（Colletotrichumfructicola）、菜豆刺盤孢真菌（Colletotrichumlindemuthianum）尖孢鐮刀菌（Fusariumoxysporum）、禾谷鐮刀菌（Fusariumgraminearum）、冬蟲夏草（Cordycepsmilitaris）、核盤菌（Sclerotiniasclerotiorum）、灰葡萄孢（Botrytiscinerea）、串孢鐮刀菌（FusariumVerticillioides）、構(gòu)巢曲霉（Aspergillusnidulans）、稻瘟菌（Magnaporthegrisea）、栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica）、柄孢菌（Podosporaanserina）、大麥殼針孢（Septoriapasserinii）、蜂蜜球囊菌（Ascosphaeraapis）中的同源蛋白進(jìn)行序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)：其和果生刺盤孢（Colletotrichumfructicola）的親緣關(guān)系最近。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]中國(guó)蘋果炭疽病病原菌的遺傳多樣性[D]. 符丹丹.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014

碩士論文
[1]PEG介導(dǎo)的蘋果果生刺盤孢Colletotrichum fructicola原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化體系的研究[D]. 韓小路.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[2]禾谷鐮刀菌AMT1基因的功能研究[D]. 王光輝.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010



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