本研究針對重要的農業(yè)害蟲白星花金龜Protaetia brevitarsis幼蟲,建立RNA干擾體系,以期為免疫相關基因功能研究奠定基礎。通過血腔注射dsRNA,成功干擾了肽聚糖識別蛋白（peptidoglycan-recognition protein LB,PGRP-LB）基因的表達,發(fā)現(xiàn)dsRNA注射量為9μg,注射后48 h取樣,pgrp-lb基因沉默效率最高。通過血腔注射對白星花金龜無殺蟲活性的Bt菌株G03,發(fā)現(xiàn)pgrp-lb基因沉默破壞了白星花金龜幼蟲的免疫防御系統(tǒng),顯著提高了白星花金龜對G03菌株的敏感性。表達免疫識別基因dsRNA菌株的構建,將為白星花金龜?shù)纳锓乐翁峁┬滤悸贰?nbsp;

【文章來源】：植物保護. 2020,46(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【圖文】：

dsRNA注射后不同時間采樣目的基因

為了進一步分析免疫相關蛋白PGRP-LB在鞘翅目及其他昆蟲中的親緣關系并預測其生物學功能,構建了PGRP-LB蛋白親緣關系樹。其中,白星花金龜與鞘翅目多食亞目的食糞金龜Onthophagus taurus序列相似程度較高,說明兩者遺傳關系較為接近,PGRP-LB蛋白序列具有較高的相似性,這與物種親緣關系分布一致。說明了其PGRP-LB蛋白在功能和結構上與已報道的其他鞘翅目昆蟲相似(圖1)。2.2 pgrp-lb基因RNA干擾載體構建

通過在線預測(http://rnaidesigner.thermofisher.com/rnaiexpress/)蛋白表達的ORF區(qū)541 bp位點到1 207 bp位點中潛在的RNAi靶位點,在734～1 059 bp位點處得到10個可能的RNAi位點,所以選擇了該325 bp序列作為干擾片段進行克隆。同時以實驗室已有的GFP蛋白核酸序列為模板,對其中173～677 bp片段進行克隆。將目的片段和L4440載體進行雙酶切并連接,成功構建了L4440-pgrp-lb及L4440-gfp重組質粒(圖2)。2.2.2 pgrp-lb-dsRNA及gfp-dsRNA的誘導表達

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]小菜蛾免疫Bt動力學的DGE分析及其PGRP-LB基因的克隆[D]. 張玉清.華南農業(yè)大學 2016
[3]PGRP-LB和PGRP-SB基因在橘小實蠅免疫及腸道微生物調控中的作用研究[D]. 王愛琳.華中農業(yè)大學 2015
[4]白星花金龜生物學及其對玉米秸稈取食習性的研究[D]. 楊誠.山東農業(yè)大學 2014



本文編號：3279312