由野油菜黃單胞菌錦葵致病變種（Xanthomonascampestrispv.malvacearum,Xcm）侵染引起棉花角斑病在歷史上危害較輕,是一種棉花次要病害,棉花角斑病菌的致病機(jī)制研究較少。近年來,由于海島棉品種的推廣和氣候條件的變化,棉花角斑病危害逐年加重。因此,研究Xcm的致病機(jī)制,對(duì)于制定高效的防治措施具有重要價(jià)值。ClpA是一種保守存在的細(xì)菌內(nèi)蛋白質(zhì)量控制因子,通過水解ATP來推動(dòng)細(xì)胞內(nèi)異常蛋白的降解,ClpA在病菌Xcm中的作用尚未見報(bào)道。前期研究中,我們證明了 ClpA參與Xcm對(duì)于棉花的致病性,但是受ClpA調(diào)控的致病因子類型和代謝途徑有待闡明。本研究通過敲除Xcm野生型和△clpA突變體的5個(gè)差異表達(dá)蛋白的編碼基因,測(cè)定野生型與缺陷型菌株的表型,在此基礎(chǔ)上,解析ClpA對(duì)于Xcm的調(diào)控作用。利用生物信息學(xué)方法比對(duì)前期蛋白質(zhì)組學(xué)方法測(cè)定出Xcm野生型和△clpA突變體的差異表達(dá)蛋白的部分氨基酸序列,鑒定出5個(gè)差異表達(dá)蛋白。它們分別是酮戊二酸半醛脫氫酶（ketoglutarate semialdehyde dehydrogenase,KsdD）,青霉素結(jié)合蛋白（pe... 

【文章來源】：河南大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１．?５個(gè)基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域??Ｆｉｇｕｒｅ３－１．?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｄｏｍａｉｎｓ?ｅｎｃｏｄｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｆｉｖｅ?ｇｅｎｅｓ??

取驗(yàn)證正確的ｐＫ１８－ｆａｃ／Ｄ?ｕｐ－ｄｏｗｎ—ｃｏ／／?ｐｉｒ丨１６質(zhì)粒２ｊ＿ｉＬ，電擊轉(zhuǎn)化至??ｃｏ／／Ｓ１７－１中，涂布Ｋｍ抗性平板。提取板上長(zhǎng)出的單菌落的質(zhì)粒，分別進(jìn)行ＰＣＲ??擴(kuò)增驗(yàn)證和酶切驗(yàn)證，得到的結(jié)果和預(yù)想的結(jié)果相符合（如圖３－３）。??３．２．４突變株的篩選??（１）

??圖３－３？目的基因敲除載體酶切驗(yàn)證結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ３－３．?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｗｏ?ｅｎｚｙｍｅｓ?ｄｉｇｅｓｔ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｖｅｃｔｏｒｓ?ｐｌａｓｍｉｄ??注：Ｍ代表Ｍａｒｋｅｒ，?１代表擴(kuò)增出的上下游連接片段，２代表雙酶切后的敲除載體，３??代表用同樣的酶進(jìn)行雙酶切后的ｐＫｌ８載體。Ａ代表敲除載體，Ｂ代表；敲除載體，??Ｃ代表電敲除載體，Ｄ代表／ｐｅｒ敲除載體，Ｅ代表敲除載體。??（２）?電擊轉(zhuǎn)化ＣＷＳ１７－１??取驗(yàn)證正確的ｐＫ１８－ｆａｃ／Ｄ?ｕｐ－ｄｏｗｎ—ｃｏ／／?ｐｉｒ丨１６質(zhì)粒２ｊ＿ｉＬ，電擊轉(zhuǎn)化至??ｃｏ／／Ｓ１７－１中，涂布Ｋｍ抗性平板。提取板上長(zhǎng)出的單菌落的質(zhì)粒，分別進(jìn)行ＰＣＲ??擴(kuò)增驗(yàn)證和酶切驗(yàn)證，得到的結(jié)果和預(yù)想的結(jié)果相符合（如圖３－３）。??３．２．４突變株的篩選??（１）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]花生熱激蛋白AhHSP70與熱激因子AhHSF基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 李翠,侯蕾,任麗,張燁,鄭奕雄,王興軍.  山東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(04)
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碩士論文
[1]棉花角斑病菌hpaXm基因敲除與互補(bǔ)載體構(gòu)建[D]. 王慕瑾.海南大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3264283