中華蜜蜂囊狀幼蟲(chóng)病（Chinese Sacbrood Disease,CSBD）,是由中華蜜蜂囊狀幼蟲(chóng)病毒（Chinese Sacbrood Virus,CSBV）引起的一種高致病性、高傳染性的病毒性疾病,俗稱為“蜂癌”,可以造成蜜蜂幼蟲(chóng)的大量死亡。然而,目前還沒(méi)有合適的包括CSBV在內(nèi)的蜜蜂病毒培養(yǎng)體系,這極大地限制了CSBV的研究和防治。在CSBV的檢測(cè)上,癥狀診斷不夠確切,電鏡觀察和血清學(xué)檢測(cè)費(fèi)力耗時(shí),尤其是很難獲得CSBV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清,使得通過(guò)免疫學(xué)方法對(duì)CSBV進(jìn)行檢測(cè)的研究鮮有報(bào)道,而分子生物學(xué)診斷則面臨需要特殊實(shí)驗(yàn)設(shè)備、成本較高等問(wèn)題,只能用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),無(wú)法大面積推廣。鑒于此,本研究以本實(shí)驗(yàn)室分離到的CSBV基因?yàn)榛A(chǔ),分別以優(yōu)化改造后用Linker連接的VP1、VP2基因和優(yōu)化后的連續(xù)編碼VP2、VP4和VP1整段基因?yàn)榘谢?進(jìn)行原核表達(dá),并用純化的表達(dá)蛋白免疫小鼠和雞,比較這兩個(gè)表達(dá)蛋白的抗原性,篩選出抗原性較好的蛋白代替CSBV作為免疫原,制備單克隆抗體。利用制備的單克隆抗體研制雙抗體夾心ELISA檢測(cè)試劑盒,并對(duì)試劑盒的性能進(jìn)行檢測(cè)。具體研究?jī)?nèi)容如下:1.目的... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

CSBV結(jié)構(gòu)蛋白Fig.1-1StructuralProteinofCSBV

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)專業(yè)學(xué)位博士學(xué)位論文成功的擴(kuò)增出了 VP2-P-VP1（1708bp）和 VP2-VP4-VP1（1771bp）（圖 3-2）。連接到 pMD1載體上，經(jīng)雙酶切鑒定（圖 3-3）為陽(yáng)性的質(zhì)粒，送生工生物工程（上海）股份有限公司行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果正確，成功構(gòu)建了 pMD18-T-VP2-P-VP1 和 pMD18-T-VP2-VP4-VP1 質(zhì)

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)專業(yè)學(xué)位博士學(xué)位論文成功的擴(kuò)增出了 VP2-P-VP1（1708bp）和 VP2-VP4-VP1（1771bp）（圖 3-2）。連接到 pMD1載體上，經(jīng)雙酶切鑒定（圖 3-3）為陽(yáng)性的質(zhì)粒，送生工生物工程（上海）股份有限公司行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果正確，成功構(gòu)建了 pMD18-T-VP2-P-VP1 和 pMD18-T-VP2-VP4-VP1 質(zhì)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]RNAi靶向VP2基因抑制中蜂囊狀幼蟲(chóng)病毒在中華蜜蜂幼蟲(chóng)體內(nèi)復(fù)制研究[J]. 馬躍宇,費(fèi)東亮,郭亞茜,金宏凱,張溪研,馬鳴瀟.  病毒學(xué)報(bào). 2019(01)
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[8]雜交-雜交瘤技術(shù)制備BsMAb的研究進(jìn)展及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 王鋒,王宇,王弘,肖治理.  食品科學(xué). 2016(13)
[9]蜜蜂囊狀幼蟲(chóng)病研究進(jìn)展[J]. 李薇,薛菲,Wubie Abebe Jenberie,黃家興,國(guó)占寶,周婷,徐書(shū)法.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2014(06)
[10]蜂農(nóng)“傷不起”——對(duì)2013年陜西幾起重大蜜蜂死亡事件的思考[J]. 黎九洲,黎哲.  蜜蜂雜志. 2013(12)

碩士論文
[1]豬A型口蹄疫病毒sIgA間接ELISA方法的建立[D]. 羅虹.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]中蜂幼蟲(chóng)膜蛋白酵母雙雜交文庫(kù)構(gòu)建及與中蜂囊狀幼蟲(chóng)病毒VP2互作宿主蛋白篩選[D]. 岳金金.錦州醫(yī)科大學(xué) 2018
[3]抗中蜂囊狀幼蟲(chóng)病毒VP2蛋白卵黃抗體制備及其間接ELISA檢測(cè)方法的建立[D]. 李芳兵.錦州醫(yī)科大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3225253