原花青素是廣泛存在于植物中重要的一種次級代謝產(chǎn)物,在植物體內(nèi)起到抗逆作用。除此之外,在人體內(nèi)還具有抗氧化、抗腫瘤、抗血栓形成等多項生理活性。研究桑樹中原花青素生物合成途徑,對改良桑樹的品質(zhì)具有重要意義。本實驗研究了川桑（Morus notabilis）中原花青素合成途徑中兩個重要基因:無色花青素還原酶基因（Leucoanthocyanidin reductase,LAR）和花青素還原酶基因（Anthocyanidin reductase,ANR）,研究結(jié)果如下:1、MnANR和MnLAR基因的鑒定與信息學(xué)分析利用生物信息學(xué)方法,在川�；蚪M數(shù)據(jù)庫中鑒定到了1個ANR和1個LAR基因,基因結(jié)構(gòu)分析,發(fā)現(xiàn)兩個基因與其他植物中的同源基因含有相同的的內(nèi)含子數(shù)量和位置,且含有相同的保守結(jié)構(gòu)域。多序列比對顯示它們與其他物種中的同源基因高度相似。在進化分析中,MnANR和MnLAR與雙子葉木本植物的同源基因密切相關(guān)。2、不同果色桑果成熟過程中ANR和LAR的表達分析組織特異性分析可知ANR和LAR在桑葉中表達量最高,桑果中其次。在各個組織中LAR的表達量遠(yuǎn)高于ANR。定量分析兩種果色桑果成熟過程中A... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 文獻綜述
    1.1 概述
    1.2 原花青素簡介
    1.3 原花青素結(jié)構(gòu)
    1.4 原花青素合成途徑及關(guān)鍵酶基因
    1.5 原花青素的生理功能
        1.5.1 原花青素的抗氧化作用
        1.5.2 原花青素的抗癌作用
        1.5.3 原花青素的抗菌作用
        1.5.4 原花青素在植物體內(nèi)的抗脅迫作用
        1.5.5 原花青素對植物的抗菌作用
    1.6 原花青素的提取以及檢測方法
第2章 引言
    2.1 研究目的及意義
    2.2 主要研究內(nèi)容
    2.3 技術(shù)路線
第3章 桑樹原花青素生物合成的關(guān)鍵酶基因Mn ANR和 Mn LAR的鑒定、克隆及信息學(xué)分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 序列信息獲得
        3.1.3 主要使用軟件
    3.2 主要試劑及配置方法
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 主要溶液配方
        3.2.3 主要儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 桑樹花青素還原酶基因以及無色素還原酶基因的鑒定
        3.3.2 RNA的提取及質(zhì)量檢測
        3.3.3 cDNA合成
        3.3.4 原花青素生物合成基因的克隆
        3.3.5 花青素還原酶與無色花色素還原酶基因的多序列比對與系統(tǒng)發(fā)生分析
    3.4 結(jié)果分析
        3.4.1 桑樹中ANR和 LAR基因的克隆及生物信息學(xué)分析
        3.4.2 ANR和 LAR啟動子序列分析
    3.5 小結(jié)與討論
第4章 桑樹MnANR和 MnLAR基因的表達分析以及原花青素含量測定
    4.1 生物材料
    4.2 主要使用試劑及溶液配制方法
        4.2.1 主要試劑
        4.2.2 主要儀器
        4.2.3 主要配方
    4.3 實驗方法
        4.3.1 RNA提取及質(zhì)量檢測
        4.3.2 cDNA的合成
        4.3.3 目的基因在川桑組織以及果實成熟過程中的表達量分析
        4.3.4 目的基因在不同逆境脅迫下的表達量
        4.3.5 桑樹原花青素的提取及UPLC檢測
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 原花青素生物合成相關(guān)基因在川桑中組織表達分析
        4.4.2 珍珠白和粵椹大10中MnANR和 MnLAR基因在果實成熟過程中的表達分析
        4.4.3 桑葚原花青素UPLC的定量檢測
        4.4.4 川桑MnANR基因和MnLAR基因在不同逆境脅迫下的表達
    4.5 小結(jié)與討論
第5章 桑樹ANR和 LAR基因在煙草中功能初探
    5.1 生物材料
    5.2 主要使用試劑及溶液配方
        5.2.1 主要試劑
        5.2.2 主要儀器
        5.2.3 主要溶液配方
    5.3 實驗方法
        5.3.1 轉(zhuǎn)基因過表達載體的構(gòu)建
        5.3.2 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化
        5.3.3 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化及單克隆菌液制備步驟
        5.3.4 煙草葉盤轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因陽性植株的篩選
        5.3.5 轉(zhuǎn)基因陽性植物的繼代和生根
        5.3.6 轉(zhuǎn)基因植株中目的基因表達水平的檢測
        5.3.7 DMACA染色
        5.3.8 灰霉菌對煙草葉片的處理方法
        5.3.9 在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)灰霉菌的方法
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 轉(zhuǎn)基因植株的檢測
        5.4.2 川桑中的MnANR和 MnLAR基因在煙草中的異源表達
        5.4.3 轉(zhuǎn)基因植株的抗病性檢測
        5.4.4 桑樹MnANR和 MnLAR基因轉(zhuǎn)入煙草后對煙草花顏色的影響
    5.5 小結(jié)與討論
第6章 綜合與討論
參考文獻
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致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3198894