發(fā)布時(shí)間：2021-05-20 14:21

　　植物在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中已經(jīng)具備了相對(duì)完善的防御系統(tǒng)來(lái)抵御病原菌的侵入與生長(zhǎng)。植物病害影響植株的養(yǎng)分吸收、光合作用、生長(zhǎng)發(fā)育等代謝活動(dòng),因而植物產(chǎn)量、品質(zhì)也會(huì)受到影響。類病斑突變體往往能夠增強(qiáng)植株對(duì)病原菌的抗性,這對(duì)于植物的育種以及抗病機(jī)制的研究極為重要。本研究經(jīng)甲基磺酸乙酯（ethylmethane sulfonate,EMS）誘變水稻秈型三系恢復(fù)系縉恢10號(hào),獲得了一個(gè)葉片和葉鞘均產(chǎn)生類病斑的突變體als1（apoptosis leaf and sheath 1）,對(duì)als1突變體進(jìn)行了表型分析、細(xì)胞學(xué)觀察、防御反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)分析、組織化學(xué)分析、遺傳分析、生理指標(biāo)測(cè)定、基因的表達(dá)部位分析、光誘導(dǎo)分析、光合色素含量測(cè)定等研究,并利用分子標(biāo)記對(duì)該突變體進(jìn)行遺傳連鎖分析和精細(xì)定位,同時(shí)進(jìn)行了候選基因的功能互補(bǔ)驗(yàn)證。本研究為水稻抗病機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1突變體als1表型分析突變體als1在苗期表型與野生保持一致,從四葉期開(kāi)始在倒四葉葉尖和葉鞘出現(xiàn)褐色的斑點(diǎn),隨著植株生長(zhǎng)斑點(diǎn)數(shù)逐漸增多直至布滿所有葉片及葉鞘,進(jìn)入成熟期葉片逐漸從葉尖開(kāi)始至葉片中上部呈現(xiàn)枯萎。在野生型作... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物類病斑突變體的研究
        1.1.1 類病斑突變體的概念及分類
        1.1.2 類病斑突變體斑點(diǎn)命名、特征及來(lái)源
        1.1.3 類病斑突變體的發(fā)生機(jī)制
        1.1.4 類病斑突變體的抗病機(jī)制
    1.2 水稻類病斑突變體的研究進(jìn)展
    1.3 水稻類病斑突變體的遺傳模式
    1.4 水稻類病斑突變體的研究意義
第2章 引言
    2.1 研究目的及意義
    2.2 技術(shù)路線
第3章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑配方
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 表型鑒定與農(nóng)藝性狀分析
        3.2.2 遮光處理
        3.2.3 光合速率和光合色素含量的測(cè)定
        3.2.4 冷凍切片觀察
        3.2.5 DAB和臺(tái)盼藍(lán)染色
        3.2.6 生理指標(biāo)的測(cè)定
    3.3 目的基因的分子定位
        3.3.1 定位群體的構(gòu)建
        3.3.2 基因組DNA的提取
        3.3.3 聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳
        3.3.4 親本多態(tài)性篩選
        3.3.5 基因定位
        3.3.6 遺傳圖譜的構(gòu)建
        3.3.7 PCR反應(yīng)
    3.4 候選基因測(cè)序及功能預(yù)測(cè)
        3.4.1 RNA提取
        3.4.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        3.4.3 候選基因PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系
        3.4.4 PCR產(chǎn)物膠回收
        3.4.5 候選基因連接體系
        3.4.6 遺傳轉(zhuǎn)化
        3.4.7 質(zhì)粒的提取
    3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)
    3.6 候選基因互補(bǔ)驗(yàn)證
        3.6.1 互補(bǔ)載體的構(gòu)建
        3.6.2 轉(zhuǎn)基因驗(yàn)證
    3.7 稻瘟病抗性分析
        3.7.1 稻瘟病的接種
        3.7.2 水楊酸(SA)和茉莉酸(JA)含量的測(cè)定
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 突變體als1 表型分析
    4.2 突變體als1 的光誘導(dǎo)反應(yīng)
    4.3 光合作用分析和光合色素含量
    4.4 細(xì)胞學(xué)觀察
    4.5 組織化學(xué)分析
    4.6 生理指標(biāo)的測(cè)定
    4.7 防御反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)
    4.8 遺傳分析
    4.9 基因定位及互補(bǔ)驗(yàn)證
        4.9.1 基因定位
        4.9.2 基因互補(bǔ)驗(yàn)證
    4.10 ALS1基因表達(dá)分析
    4.11 稻瘟病抗性分析
第5章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 在突變體als1中先天免疫被激活
        5.1.2 突變體als1的表型受光照的誘導(dǎo)
        5.1.3 ALS1基因編碼一個(gè)典型的CRK介導(dǎo)免疫反應(yīng)
        5.1.4 ALS1介導(dǎo)的水稻稻瘟病反應(yīng)
    5.2 主要結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
在校期間所參加的科研課題和發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3197903