斜紋夜蛾（Spodoptera litura）是全球性分布的農(nóng)業(yè)害蟲,具繁殖快、食性雜等特點,斜紋夜蛾對農(nóng)藥抗性的日益增強,常用農(nóng)藥將逐漸降低對斜紋夜蛾的治理效率,探究其中的原因并采取措施已經(jīng)迫在眉睫。斜紋夜蛾具有完善的嗅覺感受系統(tǒng),而化學感受蛋白（Chemosensory Protein）作為其中不可缺少的組成部分,扮演著重要的角色。研究表明,農(nóng)藥與害蟲嗅覺系統(tǒng)有著密不可分的關系。因此,有必要對斜紋夜蛾化學感受蛋白的功能及農(nóng)藥與斜紋夜蛾化學感受蛋白之間的相互關系進行研究。本研究克隆了16個斜紋夜蛾化學感受蛋白（SlituCSP）基因,對16個SlituCSP進行了系統(tǒng)發(fā)育、WebLogo、三維結構、信號肽等生物信息學分析。通過熒光定量PCR分析了16個SlituCSP在雌雄觸角中的表達水平差異及在雄蛾中的組織表達特性,結果顯示,15個SlituCSP在雄性觸角中的表達水平高于雌性觸角,SlituCSP在雄性各個組織中均有表達,部分SlituCSP在特定組織中表達水平較高,和表達量低的組織相比,其差異甚至達到千倍以上。用毒死蜱、甲維鹽和氟蟲腈等三種治理斜紋夜蛾的常用農(nóng)藥對斜紋夜蛾雄蛾進... 

【文章來源】：中國計量大學浙江省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
1 緒論
    1.1 斜紋夜蛾
    1.2 化學感受蛋白
        1.2.1 昆蟲嗅覺系統(tǒng)
        1.2.2 昆蟲化學感受蛋白
        1.2.3 昆蟲化學感受蛋白的生化特性
        1.2.4 昆蟲化學感受蛋白分子結構
        1.2.5 昆蟲化學感受蛋白的生理功能
    1.3 農(nóng)藥概況
    1.4 農(nóng)藥與昆蟲CSPs的關系
    1.5 本課題的研究內(nèi)容及其意義
    1.6 課題來源及論文內(nèi)容安排
2 SlituCSP的系統(tǒng)發(fā)育分析、WebLogo和三維結構分析
    2.1 材料與方法
        2.1.0 序列獲取
        2.1.1 系統(tǒng)發(fā)育樹構建
        2.1.2 保守位點分析及信號肽預測
        2.1.3 三維結構預測
    2.2 結果
        2.2.1 系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.2.2 保守位點分析及信號肽預測
        2.2.3 三維結構預測
    2.3 討論
3 SlituCSP的性別表達差異和雄蛾的組織表達特性
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試蟲采集
        3.1.2 樣品處理與收集
        3.1.3 RNA提取、第一鏈cDNA的合成
        3.1.4 基因的克隆和測序
        3.1.5 實時熒光定量PCR（qRT-PCR）
        3.1.6 數(shù)據(jù)分析
    3.2 結果
        3.2.1 SlituCSP在雌雄觸角中的表達差異
        3.2.2 SlituCSP雄蛾組織表達特性
    3.3 討論
4 SlituCSP的時空表達特性及農(nóng)藥等因子對表達的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 樣品采集
        4.1.2 樣品處理
        4.1.3 RNA的提取及cDNA第一鏈合成
        4.1.4 qRT-PCR
        4.1.5 數(shù)據(jù)處理
    4.2 結果
        4.2.0 4個SlituCSP基因的時空表達
        4.2.1 逆境條件下對4個SlituCSP表達的影響
        4.2.2 毒死蜱、甲維鹽、氟蟲腈對斜紋夜蛾雄蛾CSP表達量的影響
        4.2.3 斜紋夜蛾雄蛾CSPs對毒死蜱、甲維鹽、氟蟲腈響應程度分析
        4.2.4 性信息素對4個SlituCSP表達的影響
    4.3 討論
5 SlituCSP與農(nóng)藥的結合及下調SlituCSP18基因的表達對斜紋夜蛾存活率的影響
    5.1 實驗材料與方法
        5.1.1 4 個SlituCSPs表達載體的構建
        5.1.2 重組SlituCSP的純化
        5.1.3 Western Blot檢測
        5.1.4 熒光競爭結合實驗
        5.1.5 RNA雙鏈的合成及注射
        5.1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    5.2 結果
        5.2.1 4 個SlituCSPs表達載體的構建
        5.2.2 4 個SlituCSPs的原核表達與純化
        5.2.3 4 個SlituCSP蛋白與三種農(nóng)藥的結合
        5.2.4 農(nóng)藥對SlituCSP基因轉錄水平的影響與SlituCSP和農(nóng)藥結合強度的比較
        5.2.5 毒死蜱、甲維鹽、氟蟲腈對斜紋夜蛾雄蛾存活率的影響
        5.2.6 基因干擾SlituCSP18后，毒死蜱、甲維鹽、氟蟲腈對斜紋夜蛾雄蛾存活率的影響
    5.3 討論
6 研究總結與展望
    6.1 研究總結
    6.2 論文創(chuàng)新點
    6.3 研究展望
參考文獻
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]低濃度毒死蜱對斜紋夜蛾幼蟲生長發(fā)育和食物利用的影響[J]. 唐文成,孫虹霞,舒迎花,周強,張古忍.  環(huán)境昆蟲學報. 2009(02)
[2]斜紋夜蛾的生物學特性[J]. 姚文輝.  華東昆蟲學報. 2005(02)
[3]小菜蛾、甜菜夜蛾的抗藥性現(xiàn)狀及治理對策[J]. 司升云,吳仁鋒,劉小明,鄒豐.  長江蔬菜. 2001(01)
[4]斜紋夜蛾天敵作用的評價[J]. 蔣杰賢,梁廣文,龐雄飛.  應用生態(tài)學報. 1999(04)
[5]斜紋夜蛾的抗藥性及其防治[J]. 吳世昌,顧言真,王冬生.  上海農(nóng)業(yè)學報. 1995(02)
[6]我國的大害蟲——斜紋夜蛾[J]. 束炎南.  昆蟲知識. 1959(03)



本文編號：3174497