嘧霉胺是一種內(nèi)吸兼具熏蒸作用的苯胺嘧啶類殺菌劑,由于其對黃瓜和番茄等蔬菜的灰霉病均有很好的防治作用,不合理的施用導(dǎo)致果蔬類的嘧霉胺殘留量經(jīng)常超標(biāo),從而危害環(huán)境和人類的健康。現(xiàn)階段,對嘧霉胺的殘留檢測方法有LC-MS、GC、BS和TLC等,但是這些方法有前處理復(fù)雜、對專業(yè)人員要求高和設(shè)備昂貴等缺點。所以應(yīng)對嘧霉胺建立一種快速、靈敏、高效的檢測方法。酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）方法具有上述優(yōu)點外,同時還具有檢測成本低、適合大量樣品快速現(xiàn)場檢測的需要。因此,酶聯(lián)免疫分析技術(shù)對嘧霉胺殘留檢測具有實際意義。本研究探索了四條嘧霉胺半抗原（PMTH）的合成路線,并最終確定以對硝基苯胺和2-氯-4,6-二甲基嘧啶為起始原料,通過氨基取代、硝基還原和酯的氨解合成嘧霉胺半抗原,并得到經(jīng)¹H-NMR、TLC和MS的確證。采用混合酸酐法將PMTH和牛血清蛋白（BSA）偶聯(lián);采用活化酯法將PMTH和雞卵清蛋白（OVA）偶聯(lián),經(jīng)UV證明偶聯(lián)物:PMTH-BSA（免疫原）、PMTH-OVA（包被抗原）均偶聯(lián)成功,其中,PMTH與BSA的偶聯(lián)比為14:1;PMTH和OVA的偶聯(lián)比為6:1。將合... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

間接競爭法的原理

圖 1-2 直接競爭法的原理Figure 1-2 Principle of direct competition method.2.3 雙抗夾心法雙抗體夾心法，是將含有已知抗體的抗血清包被在固相載體的表面，然后加測抗原，若抗原和抗體兩者是特異性的，就會發(fā)生結(jié)合，經(jīng)過洗滌會將多余抗洗掉。再加入與待測抗原能發(fā)生特異性反應(yīng)的酶標(biāo)抗體，形成“夾心”；加入酶的底物，若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生，說明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原。雙抗心法適用于測定大分子抗原，不適用于測定半抗原及小分子抗原，因其不能形兩位點夾心。

圖 1-2 直接競爭法的原理Figure 1-2 Principle of direct competition method1.4.2.3 雙抗夾心法雙抗體夾心法，是將含有已知抗體的抗血清包被在固相載體的表面，然后加待測抗原，若抗原和抗體兩者是特異性的，就會發(fā)生結(jié)合，經(jīng)過洗滌會將多余抗體洗掉。再加入與待測抗原能發(fā)生特異性反應(yīng)的酶標(biāo)抗體，形成“夾心”；加入該酶的底物，若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生，說明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原。雙抗夾心法適用于測定大分子抗原，不適用于測定半抗原及小分子抗原，因其不能形成兩位點夾心。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]農(nóng)藥殘留的快速檢測和前處理技術(shù)的研究[D]. 錢立立.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]三聚氰胺ELISA快速檢測試劑盒的研制[D]. 岳慧慧.集美大學(xué) 2013
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[3]樂果酶聯(lián)免疫試劑盒的研制[D]. 李興霞.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3103595