煙粉虱Bemisia tabaci（Gennadius）,隸屬于半翅目粉虱科（Hemiptera:Aleyrodidae）,作為世界性經(jīng)濟(jì)害蟲(chóng),其寄主植物眾多,給全球范圍內(nèi)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大危害與經(jīng)濟(jì)損失。除吸食植物汁液造成直接危害外,煙粉虱也是傳播植物病毒效率最高的介體之一,瓜類褪綠黃化病毒（Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV）就是由煙粉虱Bemisia tabaci B型和Q型以半持久性方式特異性傳播的。近年來(lái),CCYV嚴(yán)重危害著我國(guó)及亞洲其他地區(qū)的瓜類植物等。很多研究證明植物病毒可以對(duì)介體昆蟲(chóng)產(chǎn)生影響,但目前尚無(wú)CCYV對(duì)介體煙粉虱影響的系統(tǒng)研究。本研究以B型和Q型煙粉虱、瓜類褪綠黃化病毒及黃瓜等為研究材料,運(yùn)用分子生物學(xué)、昆蟲(chóng)生態(tài)學(xué)等技術(shù),研究CCYV對(duì)介體煙粉虱生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖的影響以及各齡期若蟲(chóng)的帶毒能力。研究?jī)?nèi)容包括:B型和Q型煙粉虱各齡期種群在健康和感染CCYV的寄主植物黃瓜上的存活率、體型大小、發(fā)育歷期以及各項(xiàng)生命參數(shù)等。此外,我們還利用實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)了B型、Q型煙粉虱在帶毒植株上各齡期若蟲(chóng)的病毒量。期望本研究能為病毒-介體... 

【文章來(lái)源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

煙粉虱的生活史Fig.1ThelifehistoryofBemisiatabaci

圖 2 CCYV 侵染瓜類葉片的癥狀Fig. 2 Symptoms of CCYV infection on melon化病毒研究進(jìn)展報(bào)道的一種新病毒，CCYV 的各項(xiàng)研究工作皆處于初始階段。寄主植抗性研究等方面是當(dāng)下研究的集中熱點(diǎn)（Okuda et al., 2010; 袁媛, 2013; Okuda et al., 2013）。Okuda et al. (2010)對(duì) CCYV 全序列進(jìn)行8607 個(gè)核酸堿基（nucleotides）（GenBank AB523788），RNA2 有 8（GenBank AB523789）組成（圖 3）。Double antibody sandwich essay （雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，簡(jiǎn)稱 DAS-ELISA）是由 K的一種檢測(cè) CCYV 的方法。隨后，在 2014 年 Wang et al. 建立了一種rse transcription loop-mediated isothermal amplification（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)方法可快速準(zhǔn)確地檢測(cè) CCYV，比常規(guī) RT-PCR 高 105倍。施艷等（達(dá)了瓜類褪綠黃化病毒的外殼蛋白，以表達(dá)產(chǎn)物為抗原，大量制備特確了煙粉虱傳播該病毒的獲毒時(shí)間、傳毒時(shí)間和持毒時(shí)間等傳毒行為

圖 3 瓜類褪綠黃化病毒（CCYV）的 RNA1 和 RNA2 序列（梁相志，2014）Fig. 3 The sequencing strategy of Cucurbit chlorotic yellows virus (CCYV) RNA1 and RNA2注：圖中矩形代表開(kāi)放閱讀框（ORFs），黑色框代表預(yù)測(cè)的 RNA1 編碼的物質(zhì)：Met, 甲基轉(zhuǎn)移酶；Hel, R解旋酶 1；RdRp, 依賴于 RNA 的 RNA 聚合酶；TM，跨膜結(jié)構(gòu)域。RNA1 中的點(diǎn)線部分代表假定的切割位點(diǎn)。OR的名稱標(biāo)在其下方。比例尺代表 1 kb。Note: Rectangles represent open reading frames (ORFs) in which predicted motifs are shown as filled boxes wnames indicated above: Met, viral methyltransferase; Hel, RNA helicase 1; RdRp, RNA-dependent RNA polymerase; Ttransmembrane domain. A dot-line in RNA1 indicates a presumed cleavage site. The names of ORFs are indicated belThe scale gives approximate sizes in kilobases.1.5 熒光定量技術(shù)1.5.1 熒光定量技術(shù)簡(jiǎn)介Higuchi 在 1992 年提出并在 1996 年推出了一種基于 PCR 定性的核酸定量技術(shù) Real-tifluorescent quantitative PCR（實(shí)時(shí)熒光定量 PCR）。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)（real-time fluorescquantitative PCR）其主要原理為：在 PCR 擴(kuò)增體系中，熒光染料或者探針與擴(kuò)增產(chǎn)物相結(jié)合，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]建蘭花葉病毒SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 梁芳,張燕,王若斕,許申平,程喜梅,崔波.  江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(03)
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博士論文
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碩士論文
[1]番茄褪綠病毒的分子鑒定及熒光定量PCR檢測(cè)體系的建立與應(yīng)用[D]. 高利利.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]B型、Q型煙粉虱傳播番茄黃化曲葉病毒的差異研究[D]. 寧雯熙.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]煙草營(yíng)養(yǎng)對(duì)Q型煙粉虱發(fā)育、存活和寄主選擇性的影響及其機(jī)理研究[D]. 金鵬.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[4]煙粉虱—病毒—寄主植物之間互作特性的研究[D]. 陳功.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[5]熒光定量PCR方法在土傳煙草青枯病生防研究中的應(yīng)用[D]. 陳巧玲.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



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