綠僵菌在害蟲生物防治中起重要作用,也已經(jīng)廣泛應(yīng)用于蝗蟲等的防治。羅伯茨綠僵菌（Metarhizium robertsii,下稱綠僵菌）作為昆蟲病原真菌的模式生物,在昆蟲病原真菌的代謝調(diào)控,致病機理,遺傳調(diào)節(jié)機制和生物技術(shù)防治研究中起重大作用。多年來,國內(nèi)外學(xué)者致力羅伯茨綠僵菌致病和抗逆的分子機理研究,取得了豐碩的結(jié)果;但是作為生防真菌,羅伯茨綠僵菌仍有很多的弱點,如:殺蟲速度較慢,易被環(huán)境影響等,因此,限制了綠僵菌在生產(chǎn)上的大規(guī)模應(yīng)用。轉(zhuǎn)錄組測序可以得到某一種特定組織或者細胞的將近全部轉(zhuǎn)錄本和基因序列通過利用二代測序平臺,而今,也已廣泛應(yīng)用于真核生物,包括綠僵菌,但羅伯茨綠僵菌的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究內(nèi)容較少;且通過利用RNA-Seq技術(shù),可以解決特定的生物學(xué)問題,包括可變剪切分析,優(yōu)化基因結(jié)構(gòu),新轉(zhuǎn)錄本鑒定以及發(fā)掘新基因等。為此,本研究以羅伯茨綠僵菌為研究對象,首先在4個不同條件下（包括生長發(fā)育、逆境脅迫、侵染定殖以及退化）,培養(yǎng)綠僵菌,提取其總RNA,并完成轉(zhuǎn)錄組測序;其次,就測序所得轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行生物信息學(xué)分析,對預(yù)測的新轉(zhuǎn)錄本,完成功能注釋;最后,針對從注釋的新轉(zhuǎn)錄本中篩選到小泛素相關(guān)修... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

綠僵菌主要侵染階段

2) 合適溫片段，一次3) 對此 cD接頭，在此4) 使用 Ag的 cDNA 文度條件下，次為模板，得DNA 進行純此之后選擇gilent 2100文庫檢驗質(zhì)在儀器 The得到一條單鏈純化，粘性擇不同長短的Bioanalyze質(zhì)量，最后利ermomixer鏈的cDNA性末端的修復(fù)的片段，并er 和儀器 A利用 Illumi里添加適量A，利用堿基復(fù)以及在其并完成的 PCABI StepOnna HiSeqTM量打斷試劑配對原理，其 3’末端添加CR 擴增。nePlus RealM2000 完成劑，用以得到合成為雙鏈加 polyA 尾l-Time PCR成測序。到 m鏈c尾巴R 對

圖 2-2 信息分析流程Figure 2-2 Information analysis process2.2.3.2新轉(zhuǎn)錄本預(yù)測及分析為了發(fā)現(xiàn)所供樣品里的新轉(zhuǎn)錄本信息，我們便比對所提供樣品里測得的轉(zhuǎn)錄本和參考基因組中已有的轉(zhuǎn)錄本。然而，預(yù)測得到的新轉(zhuǎn)錄本都滿足以下幾個條件：不僅要與現(xiàn)存的已注釋基因之間有大于 200bp 的間距；而且其序列長度≥ 180bp 以及序列測定深度≥2。如圖 2-3 為新轉(zhuǎn)錄本預(yù)測方法。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]我國利用真菌防治害蟲的歷史、進展及現(xiàn)狀[J]. 李增智.  中國生物防治學(xué)報. 2015(05)
[2]SUMO修飾在眼科的研究現(xiàn)狀及進展[J]. 陸博,王欣玲,閻啟昌.  國際眼科雜志. 2015(08)
[3]真菌殺蟲劑的研究現(xiàn)狀與展望[J]. 解嬌,劉霞,張正坤,徐文靜,李啟云.  吉林農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(01)
[4]蟲生真菌的生物防治研究進展[J]. 楊運華,杜開書,石明旺.  河南科技學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版). 2011(01)
[5]蟲生真菌及其在害蟲生物控制中的應(yīng)用現(xiàn)狀與展望[J]. 王利軍,譚萬忠,羅華東,杜喜翠.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(04)
[6]蟲生真菌在農(nóng)林害蟲生物防治中的應(yīng)用[J]. 王記祥,馬良進.  浙江林學(xué)院學(xué)報. 2009(02)
[7]基因工程改良在昆蟲病原真菌中的應(yīng)用[J]. 邊強,王廣君,張澤華,高松,農(nóng)向群.  中國生物工程雜志. 2009(03)
[8]蛋白質(zhì)SUMO化修飾研究進展[J]. 韋瑋,張浩,毛建平,葉棋濃.  中國生物工程雜志. 2008(07)
[9]蟲生真菌對害蟲防治的研究與應(yīng)用[J]. 何恒果,李正躍,陳斌,文良柱.  云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2004(02)



本文編號：3074733