柑橘黃龍�。–itrus Huanglongbing,HLB）嚴重威脅世界柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,對其造成巨大經(jīng)濟損失。HLB具有一定的潛伏期,從病原菌感染到引起黃化癥狀需要一定的時間,因此建立一種高效、靈敏、快速的檢測方法,應用于柑橘產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展非常必要。細菌分泌蛋白是細菌產(chǎn)生的一種效應因子,在細菌的致病過程中起重要作用。本研究從柑橘黃龍病菌亞洲株系基因組中分析了病原菌分泌蛋白系統(tǒng)及相關分泌蛋白的10個基因,通過熒光定量RT-PCR（RT-qPCR）方法,篩選獲得RNA含量較高的2個蛋白基因。開展了分泌蛋白基因表達量和亞細胞定位研究,為研究該蛋白參與的HLB致病機理奠定基礎;同時對這2個分泌蛋白基因進行原核表達,免疫小鼠制備了特異抗血清,為408和PAP蛋白功能研究和開發(fā)HLB的蛋白檢測產(chǎn)品提供基礎。具體結(jié)果如下:（1）以海南瓊中、瓊海感染HLB的綠橙為材料,提取總DNA和RNA,制備DNA和cDNA。根據(jù)柑橘黃龍病菌亞洲株系基因組中分析的病原菌分泌蛋白系統(tǒng)及相關分泌蛋白的6個基因,設計熒光定量PCR（RT-qPCR）引物,對HLB樣品的6個基因mRNA表達量進行定量檢測。結(jié)果表明:瓊海和... 

【文章來源】：海南大學海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３綠橙樣品總ＲＡＮ的提取??

圖２綠橙樣品總ＤＮＡ的提ｈｅ?ｅｘｔｒａｃｔ?ｔｏｔａｌ?ＤＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｇｒｅｒ；?１：瓊海綠橙總ＤＮＡ提取；２ｌ?ＤＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｇｒｅｅｎ?Ｏｒａｎｇｅ?ｏｆ?ＱＯｒａｎｅ?ｏｆｉｏｎｚｈｏｎ

３．?１．２高分泌蛋白基因４促和以／７的定量篩選??熒光定量ＰＣＲ結(jié)果分析表明瓊海和瓊中６種分泌蛋白基因和內(nèi)參基因１６ＳｒＲＮＡ??的擴增曲線（圖４）均為單峰，表明擴增片段唯一，沒有非特異性擴增產(chǎn)生。ｑＲＴ－ＰＣＲ??的擴增結(jié)果表明，６個基因均擴增較弱，其中４洲和烈／３基因有擴增曲線，Ｃｔ值在??１５？３５之間，其余基因沒有明顯的擴增曲線或擴增較弱，Ｃｔ超過３５?（Ｃｔ?＞３５，表示??很低的擴增量或擴增不特異）。進－步的分析表明，在瓊海樣品中仰基因的表達水??平比別戶基因表達水平高２．４３；在瓊中樣品中，４洲基因的表達水平比烈戶基因表??達水平高９．４５比瓊海樣品中４財基因的表達水平還要高（圖５）。綜合ＲＴ－ｑＰＣＲ的結(jié)??果分析，我們從６種柑橘黃龍病菌分泌蛋白基因中篩選出２個相對含量較高的基因，??即祁＜９和州尸。??Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ?Ｃｕｒｖｅ??６１９?－ｊ?Ａ??ｅ｜?１??－８１?Ｔ?ｒ——Ｔ?—Ｔ?！?Ｔ?Ｔ?—Ｔ?－?ｒ?－?Ｔ－?－Ｔ－—Ｔ?ｒ?￣Ｔ＇一Ｉ?１?１?Ｔ?Ｔ?１??５５?５７?５９?６１?６３?６５?６７?６９?７１?７３?７５?７７?７９?８１?８３?８５?８７?８９?９１?９３?９５??Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?（Ｘ／）??圖４?６種分泌蛋白基因和內(nèi)參１６Ｓ?ｒＲＮＡ基因焚光定

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3024896