禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）是小麥赤霉病主要的致病真菌,寄主范圍主要是禾谷類作物。鐮刀菌侵染會使產量和品質下降,殘留的真菌毒素如玉米赤霉烯酮類（Zearalenone,ZEN）和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（Deoxynivallenol,DON）嚴重危害健康。同時,DON也是重要的致病因子,在小麥的侵染與致病中發(fā)揮重要作用。烯�；o酶A水合酶（enoyl-CoA hydratase,Ech1）能夠降解脂肪酸,是脂肪酸β-氧化的重要過程。但是,在植物病原真菌中了解甚少。為此,我們對禾谷鐮刀菌FgEch1進行了研究。采用生物信息學的方法在禾谷鐮刀菌基因組中得到一個FgEch1基因。利用Split-marker的方法構建禾谷鐮刀菌FgEch1基因敲除載體,通過PEG介導的原生質體轉化法獲得FgEch1基因敲除突變體?Ech1和回復菌株?Ech1-C。分析FgEch1基因敲除突變體的相關表型變化,闡明FgEch1在禾谷鐮刀菌中的功能。突變體具有下列的特征:1)突變體?Ech1對菌落生長沒有影響。2)突變體影響短鏈脂肪酸的利用。在含正丁酸和正己酸的MM培養(yǎng)基上相對生長速率分別下... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 小麥赤霉病研究進展
        1.1.1 小麥赤霉病概況
        1.1.2 禾谷鐮刀菌的生物學特性
        1.1.3 禾谷鐮刀菌致病基因的研究進展
        1.1.4 小麥赤霉病防治措施
    1.2 脂肪酸β-氧化與烯酰輔酶A水合酶
        1.2.1 脂肪酸運輸與β-氧化
        1.2.2 過氧化物酶體β-氧化
        1.2.3 烯脂酰CoA水合酶
        1.2.4 真菌烯脂酰CoA水合酶研究現(xiàn)狀
    1.3 該項研究目的和意義
2 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗菌株和載體
        2.1.2 主要溶液配制配方
        2.1.3 培養(yǎng)基配制方法
    2.2 實驗方法
        2.2.1 禾谷鐮刀菌FgEch1基因結構分析
        2.2.2 禾谷鐮刀菌的保存和培養(yǎng)
        2.2.3 提取禾谷鐮刀菌基因組DNA
        2.2.4 酵母和大腸桿菌質粒DNA提取方法
        2.2.5 普通PCR擴增反應
        2.2.6 PCR產物純化和DNA瓊脂糖凝膠膠回收
        2.2.7 構建禾谷鐮刀菌FgEch1基因敲除載體
        2.2.8 原生質體制備和轉化
        2.2.9 PCR驗證敲除轉化子
        2.2.10 Southernblot驗證敲除轉化子
        2.2.11 禾谷鐮刀菌FgEch1基因回復
            2.2.11.1 構建FgEch1基因回復載體
            2.2.11.2 獲取FgEch1基因回復菌株
        2.2.12 從生物學表型分析FgEch1基因敲除突變體
            2.2.12.1 觀察菌落形態(tài)與測量菌落生長速度
            2.2.12.2 觀察菌落的菌絲末端分支
            2.2.12.3 測定菌落對脂肪酸利用情況
            2.2.12.4 無性生殖測定
            2.2.12.5 測定氧脅迫下的敏感性
            2.2.12.6 測定有性生殖表型
            2.2.12.7 FgEch1突變體的致病性測定
3 結果與分析
    3.1 禾谷鐮刀菌FgEch1結構和進化樹分析
        3.1.1 禾谷鐮刀菌FgEch1基因的獲得
    3.2 禾谷鐮刀菌FgEch1基因的敲除
        3.2.1 敲除載體構建過程
        3.2.2 驗證敲除突變體
            3.2.2.1 PCR驗證
            3.2.2.2 Southenblot驗證
    3.3 獲得禾谷鐮刀菌FgEch1回復菌株
        3.3.1 構建FgEch1基因回復載體和回復菌株轉化
        3.3.2 驗證回復菌株?Ech1-C
    3.4 FgEch1基因敲除突變體的表型觀察
        3.4.1 FgEch1基因不影響菌落生長
        3.4.2 FgEch1基因調控脂肪酸的利用
        3.4.3 FgEch1基因影響孢子產量與孢子萌發(fā)
        3.4.4 FgEch1基因不影響有性生殖
        3.4.5 FgEch1基因調控致病性
2O₂脅迫敏感性">        3.4.6 FgEch1基因調控對H₂O₂脅迫敏感性
4 討論
5 總結與展望
    5.1 實驗總結
    5.2 研究展望
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3019461