小菜蛾（Plutella xylostella）是世界范圍內(nèi)十字花科作物的重要害蟲,也是抗藥性最嚴重的害蟲之一。氯蟲苯甲酰胺是一種以魚尼丁受體（RyR）為靶標的具有全新作用機制的雙酰胺類殺蟲劑,對鱗翅目害蟲高效。但在使用2-3年后,小菜蛾即對其產(chǎn)生了高水平抗性。已經(jīng)明確RyR突變是導致其產(chǎn)生抗性的主要機制,但對解毒酶介導的代謝抗性機制缺乏深入研究。本文主要研究細胞色素P450單加氧酶和尿苷二磷酸-糖基轉(zhuǎn)移酶（UGTs）在小菜蛾對氯蟲苯甲酰胺抗性中的作用,并從表觀遺傳學角度研究miRNA調(diào)控RyR過表達與氯蟲苯甲酰胺抗性的關系。主要結(jié)果如下:對室內(nèi)敏感種群CHS、室內(nèi)篩選抗性種群CHR和云南通海田間種群TH小菜蛾羧酸酯酶、細胞色素P450單加氧酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的比活力測定發(fā)現(xiàn),只有P450的比活力在CHR和TH中均顯著高于CHS,分別是CHS的2.1和3.2倍。檢測了 10個P450基因mRNA的相對表達量,其中CYP6BG1在5個抗性種群中均過量表達,在TH種群的相對表達量是CHS的82倍。用RNAi沉默CYP6BG1后,P450的7-乙氧基香豆素O-脫乙基活性降低45.5%;用... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

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圖４－１?ＰＣＲ鑒定果蠅品系中０７＾（７／基因??Ｆｉｇｕｒｅ?４－１?Ｉｄｅｎｔｉｆｙ?ｔｈｅ?ＣＹＰ６ＢＧＩ?ｉｎ?ｆｒｕｉｔ?ｆｌｉｅｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??

Ａｃｔｉｎ－Ｇａｌ４?ＵＡＳ－ＣＹＰ６ＢＧ１?Ｇａｌ４＞ＵＡＳ－ＣＹＰ６ＢＧ１??圖４－２不同果蠅品系中ＣＴＡ５５Ｇ／的相對表達量??Ｆｉｇｕｒｅ?４－２?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＣＹＰ６ＢＧＩ?ｉｎ?ｔｈｒｅｅ?ｆｒｕｉｔ?ｆｌｙ?ｓｔｒａｉｎｓ．??以?Ａｃｔｉｎ－Ｇａｌ４、ＵＡＳ－ＣＹＰ６ＢＧ１?和?Ａｃｔｉｎ－Ｇａｌ４＞Ｕ?ＡＳ（ＹＰ６ＢＧ?１?三個果蠅品系的?ＣＤＮ?Ａ?為模板，??采ＭＪ?ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測Ｃｍ５５Ｇ７的相對表達童。結(jié)果只在Ａｃｔｉｎ－Ｇａｌ４＞ＵＡＳ－ＣＹＰ６ＢＧｌ品系檢測到??ＣＴＰｄ８Ｇ／的表達，在兩個對照品系中均未檢測到，其中的相對表達Ｍ是與內(nèi)參基因相??比較的（圖４－２）。??４．２．３不問果繩品系對殺蟲劑的敏感性??為了研究果蠅中轉(zhuǎn)入的ＣＴＰ６ＳＧ／是否影響其對殺蟲劑的敏感性，通過生物測定獲得氯蟲苯甲??酰胺、高效氯氰菊酯和阿維菌素對ＵＡＳ－?ＣＹＰ６ＢＧ１品系的ＬＣ５〇，然后分別用ＬＣ５Ｑ的氯蟲苯甲酰胺、??高效氯氰菊酯和阿維歯素分別處理三個果蠅品系。結(jié)果顯示，與ＡＣｔｉｎ－Ｇａｌ４品系和ＵＡＳ－?ＣＹＰ６ＢＧ１??兩個對照品系相比，過表達Ｃ７Ａ５ＳＧ７的轉(zhuǎn)基因果蠅品系Ａｃｔｉｎ－Ｇａｌ４＞?ＵＡＳ－?ＣＹＰ６ＢＧ１對氯蟲苯甲??酰胺和高效氯氰菊酯的耐藥性均明顯提高，死亡率分別下降了２３．２％和２１．５％。而阿維菌素處理后??三個品系的死亡率沒有顯著差異

?＾?參??ｗ￡ｔ＾?＼：?ｖ?ｇ＾ｆｃｒ：＾??ＨＨＨＨＩ?■■■■??圖５－１重組載體中ＣＴＰ仏Ｇ／和Ｃ７５／？全長ＰＣＲ電泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ?５－１?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ?ｏｆ?ＣＹＰ６ＢＧＩ?ａｎｄ?ＣＰＲ??注：Ｍ：標準分子景?ＤＮＡ２０００?Ｍａｒｋｏｖ?Ｎｏｔｅ：?Ｍ：ＤＮＡ２０００Ｍａｒｋｅｒ．??５．２．２表達的小菜蛾ＣＹＰ６ＢＧ１蛋白活性??為了檢測表達的ＣＴＰ６５Ｇ７蛋白是否具有活性，我們按照Ｂａｃｍｉｄ－ＣＹＰ６ＢＧ１／Ｂａｃｍｉｄ－ＣＰＲ為??按１：１、３：１、５：１、７：１和１０：１的比例表達了?ＣＹＰ６ＢＧ１蛋白，并檢測了其對７－乙氧基香豆素的代??謝活性。根據(jù)熒光值的變化（表４－１），ｕｊ以看出，沒有表達ＣＹＰ６ＢＧ１蛋白的細胞，處理組和對??照組的熒光強度沒有變化，而表達了?ＣＹＰ６ＢＧ１蛋白的細胞，在Ｂａｃｍｉｄ－ＣＹＰ６ＢＧ１／Ｂａｃｍｉｄ－ＣＰＲ??不同比例下，處理組均顯著高于對照組，說明處理組表達的ＣＹＰ６ＢＧ１蛋白具有Ｏ－脫乙基活性活??性并代謝了?７－乙氧基香豆素。最初隨Ｂａｃｍｉｄ－ＣＹＰ６ＢＧ１所占比例升高其活性增強，但是比例達??到１０：１的時候

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小菜蛾抗性機理及可持續(xù)防抗對策[J]. 蘇文敏,徐麗,郁東航,郁建飛.  長江蔬菜. 2016(08)
[2]昆蟲對雙酰胺類殺蟲劑抗性機制研究進展[J]. 李秀霞,梁沛,高希武.  植物保護學報. 2015(04)
[3]轉(zhuǎn)飛蝗CYP408B1和CYP409A1基因果蠅品系對殺蟲劑的敏感性[J]. 高翠娥,張建琴,張徐波,張建珍,封云濤,吳�；�,馬恩波.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2015(06)
[4]小菜蛾不同抗性品系對殺蟲劑的抗藥性測定[J]. 程英,李文紅,金劍雪,李鳳良.  西南農(nóng)業(yè)學報. 2014(03)
[5]氯蟲苯甲酰胺對菜青蟲魚尼丁受體基因表達量的影響[J]. 鄧放,周小毛.  湖南農(nóng)業(yè)科學. 2014(07)
[6]華中地區(qū)小菜蛾對9種殺蟲劑的抗藥性測定[J]. 夏耀民,魯艷輝,朱勛,申君,游紅,李建洪.  中國蔬菜. 2013(22)
[7]shMRE11質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對BEL7402/5-FU肝癌細胞耐藥性的影響[J]. 范芳,耿磊,李長福.  細胞與分子免疫學雜志. 2013(10)
[8]氯蟲苯甲酰胺對小菜蛾魚尼丁受體基因mRNA表達量的影響[J]. 孫麗娜,楊代斌,芮昌輝,崔麗,袁會珠.  農(nóng)藥學學報. 2012(02)
[9]MicroRNA及其在昆蟲學中的研究進展[J]. 梁沛,高希武.  應用昆蟲學報. 2012(02)
[10]華南小菜蛾田間種群對氯蟲苯甲酰胺已產(chǎn)生嚴重抗性[J]. 胡珍娣,陳煥瑜,李振宇,張德雍,尹飛,林慶勝,包華理,周小毛,馮夏.  廣東農(nóng)業(yè)科學. 2012(01)

博士論文
[1]小菜蛾對氯蟲苯甲酰胺抗性的分子機制[D]. 郭磊.中國農(nóng)業(yè)大學 2014

碩士論文
[1]殺蟲劑對斜紋夜蛾UDP-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶活性的影響[D]. 婁琳琳.南京農(nóng)業(yè)大學 2014



本文編號：2954369