微孢子蟲(Microsporidia)是一類細(xì)胞內(nèi)專性寄生的真核生物,在自然界具有廣泛的宿主域,數(shù)目眾多、分布廣泛。家蠶微孢子蟲(Nosema bombycis,Nb)是微孢子蟲屬的典型種,它能夠引發(fā)家蠶微粒子病(Pebrine)。該病即可食下傳染,也可由帶病母蛾胚種傳染,是蠶業(yè)生產(chǎn)上的毀滅性病害,因此被所有蠶業(yè)生產(chǎn)國列為法定檢疫對(duì)象。除通過母蛾鏡檢淘汰帶毒蠶種外,目前家蠶微粒子病的防治方法還包括化學(xué)防治和物理防治兩大類。化學(xué)防治方法包括化學(xué)藥物消毒和化學(xué)藥物治療。消毒藥物一般具有強(qiáng)腐蝕性,而且對(duì)帶毒蠶卵中的病原體沒有防治效果;治療藥物長期服用對(duì)蠶體有一定毒性,影響蠶種質(zhì)量。已報(bào)道的物理防治法主要有溫湯浴種法、高溫即時(shí)浸酸法(高溫即浸法)及干熱空氣處理法。高溫即浸法效果明顯,操作簡單,但之前高溫即浸試驗(yàn)以多化性家蠶品種開展的研究,針對(duì)二化性蠶品種的高溫即浸法條件尚未建立,防治效果有待驗(yàn)證。本研究通過養(yǎng)蠶試驗(yàn)明確了高溫高溫即浸法對(duì)家蠶微粒子病的防治效果,采用吉姆薩染色法觀察了蠶種即浸適期病原在蠶卵中的發(fā)育形態(tài),利用熒光定量PCR技術(shù)檢測了高溫即浸處理對(duì)蠶卵中家蠶微孢子蟲的滅活效果,通過高通量測序分析了高溫即浸處理后家蠶胚胎和病原的基因表達(dá)變化,闡明了高溫即浸防治家蠶微粒子病胚種傳染的機(jī)理,為生產(chǎn)上應(yīng)用高溫即浸防治家蠶微粒子病提供科學(xué)依據(jù)。取得以下研究成果:⒈對(duì)家蠶二化性四元雜交品種兩廣二號(hào)的帶毒蠶卵進(jìn)行高溫即浸處理,蠶卵孵化后分別飼養(yǎng)至3齡眠蠶和5齡起蠶用顯微鏡鏡檢Nb,發(fā)現(xiàn)與常規(guī)即浸處理相比,帶毒蠶卵經(jīng)高溫即浸處理后家蠶微孢子蟲感染率分別為3.55±1.55%和13.10±5.90%,相對(duì)防治效果分別是92.30±2.95%和81.80±0.06%。由此可見,高溫即浸處理能夠有效阻斷家蠶微粒子病的胚種垂直傳播,對(duì)家蠶微粒子病有顯著的治療效果。2.通過吉姆薩染色法對(duì)高溫浸酸時(shí)期(卵齡18~22 h)帶毒蠶卵中家蠶微孢子蟲的發(fā)育狀態(tài)進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)帶毒蠶卵中的病原為雙核、四核裂殖體。浸酸處理48 h后,陽性對(duì)照組和常規(guī)即浸處理組蠶卵中均仍觀察到裂殖體,高溫處理組則沒有發(fā)現(xiàn)病原,推測高溫即浸處理的作用有效靶點(diǎn)為家蠶微孢子蟲的裂殖體階段。3.利用熒光定量PCR技術(shù)建立了以家蠶微管蛋白Tubulin為靶基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,對(duì)卵齡24~240 h陽性對(duì)照、常規(guī)即浸組和高溫即浸組內(nèi)帶毒蠶卵中微孢子蟲進(jìn)行絕對(duì)定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn):常規(guī)或高溫即浸處理后每日取樣蠶卵中家蠶微孢子蟲的檢測值均顯著降低,高溫即浸組明顯低于常規(guī)即浸處理,表明兩種浸酸處理對(duì)蠶卵中的家蠶微孢子蟲均有滅活作用,但是高溫處理的滅活效果更為顯著。根據(jù)即浸處理后帶毒蠶卵內(nèi)病原量的變化規(guī)律,推測高溫即浸處理能夠滅活蠶卵內(nèi)的病原裂殖體,少量未被滅活的成熟孢子則能夠繼續(xù)生長發(fā)育。4.對(duì)帶毒蠶卵分別進(jìn)行常規(guī)即浸處理和高溫即浸處理,利用RNA-Seq技術(shù)對(duì)陽性對(duì)照組、常規(guī)處理組和高溫處理組的蠶卵樣本進(jìn)行高通量測序,并對(duì)處理前后的差異表達(dá)基因(DEGs)進(jìn)行GO功能分析和KEGG pathway分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),常規(guī)處理后家蠶差異表達(dá)基因400個(gè),病原差異表達(dá)基因38個(gè),高溫處理組后家蠶差異表達(dá)基因1999個(gè),病原差異表達(dá)基因20個(gè)。高溫即浸處理后家蠶熱激蛋白等基因表達(dá)顯著上調(diào),病原差異表達(dá)基因數(shù)量較常規(guī)處理組明顯降低,推測高溫即浸處理能夠激發(fā)蠶卵免疫應(yīng)答增強(qiáng)對(duì)病原的抗性,同時(shí)影響家蠶微孢子蟲的基礎(chǔ)代謝導(dǎo)致病原裂殖體死亡。
【學(xué)位單位】：重慶師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S884.21
【部分圖文】：

圖 1.1 家蠶微孢子蟲的超微結(jié)構(gòu)[20]。Fig1.1 Ultrastructure of Nb的微孢子蟲被蟻蠶或幼蟲誤食后進(jìn)入蠶的消化道后，器和孢子形成期 3 個(gè)階段后，完成一個(gè)世代，這一過程

蟲生活史示意圖[21-22]。L.中腸腸腔；MV 微絨毛肉細(xì)胞；H.血細(xì)胞；a.長極絲孢子；b.發(fā)芽中的長殖體；g.母孢子；h.孢子母細(xì)胞；n.長極絲孢子母孢子；j.短極絲孢子；k.發(fā)芽中的短極絲孢子；m.

在卵齡分別為 18、20、22h的陽性對(duì)照與陰性對(duì)照蠶卵樣本中，陽性對(duì)照組均觀察到微孢子蟲的裂殖體，有雙核、四核裂殖體形態(tài)（黑色箭頭所指），表明沒有經(jīng)過處理的帶毒蠶卵中微孢子蟲的增殖活動(dòng)旺盛（圖3.1），紅色箭頭所指為家蠶宿主細(xì)胞核結(jié)構(gòu)。圖 3.1 不同卵齡蠶卵中家蠶微孢子蟲發(fā)育觀察。A 陽性對(duì)照組，B 陰性對(duì)照組。Fig 3.1 The development observation of Nb in silkworm eggs of different age. A positive control, Bnegative control.3.2.3 作用靶點(diǎn)的驗(yàn)證卵齡 20h時(shí)分別進(jìn)行常規(guī)和高溫即浸處理，對(duì)浸酸處理后 48h的蠶卵進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)在常規(guī)即浸處理中也可發(fā)現(xiàn)少量病原裂殖體，同期經(jīng)過高溫即浸處理后的蠶卵未發(fā)現(xiàn)病原（圖3.2），表明高溫即浸處理對(duì)微孢子蟲的裂殖體有較好的滅活效果。
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3 賀元莉;家蠶微粒子病組織病理學(xué)研究及數(shù)字化家蠶構(gòu)建初探[D];西南大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：2887811