竹肉球內(nèi)生菌又名戈茨肉球菌,是中國(guó)傳統(tǒng)中藥,僅在非洲和亞洲有所發(fā)現(xiàn),在中國(guó),主要分布在川東,藏北,云南西北部等海拔較高的地區(qū)。作為中國(guó)長(zhǎng)期以來(lái)的民間傳承的抗菌消炎藥,近年來(lái)又在抗癌方面嶄露頭角,但對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行的研究報(bào)道卻很少,因此對(duì)其含有的生物活性物質(zhì)的研究與開(kāi)發(fā),具有非常重要的意義。本論文通過(guò)鹽析法對(duì)竹肉球內(nèi)生菌進(jìn)行浸提,離心,沉淀,最后通過(guò)凍干的方法得到竹肉球內(nèi)生菌(Engleromyces goetzei P.Hennings)的粗提物,并進(jìn)行對(duì)該粗提物的抑菌活性試驗(yàn),結(jié)果表明該粗提物對(duì)農(nóng)業(yè)致病真菌的菌絲生長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用。再經(jīng)分子篩G-25凝膠柱純化后得到的產(chǎn)物,經(jīng)茚三酮和雙縮脲定性反應(yīng)證明該產(chǎn)物為粗多肽,采用濾紙片法和平板對(duì)峙法,以抑菌圈為指標(biāo)進(jìn)行抑菌活性檢測(cè),結(jié)果表明對(duì)農(nóng)業(yè)致病真菌的菌絲生長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用,其中,對(duì)小麥赤霉病菌(Gibberella zeae),核果炭疽病菌(Drupe anthrax)和茄子黃萎病菌(Verticilllium albo-atrum)的抑菌活性最高,IC_(50)分別為8.65μg/m L,9.48μg/m L和8.94μg/m L。并讓抗菌肽在酸堿,高溫,酶解和有機(jī)溶劑環(huán)境下對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行研究,結(jié)果表明除了有一定的溶劑選擇性和α-淀粉酶,胃蛋白酶對(duì)其有一定的水解性之外,該抗菌肽具有很強(qiáng)的穩(wěn)定性。用HPLC對(duì)粗多肽進(jìn)一步純化,得到電泳純的抗菌肽,并通過(guò)質(zhì)譜認(rèn)定該抗菌肽的分子量大概在5796.0 Da。以上研究,為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和研究竹肉球內(nèi)生菌中新型的天然抗菌肽,打下了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：TQ28;S481
【部分圖文】：

圖 2.1 粗多肽凍干樣品.2. 1 The Lyophilized Sample of Crude Polypep實(shí)驗(yàn)縮脲試劑反應(yīng)為作為一種定性試驗(yàn)，主要均顯陽(yáng)性（在雙縮脲反應(yīng)中，反應(yīng)液變?yōu)樽仙镔|(zhì)并且 5 min 內(nèi)變色顏色未發(fā)生得到的黃色絮狀物質(zhì)為多肽類物質(zhì)且含肽對(duì)真菌的抑菌活性測(cè)定表 2.1 粗多肽的抑菌效果ab 2. 1 TheAntibacterial Effect of Crude Pepti抑菌活性無(wú)菌水土溫水甲醇丙酮

graminearum 的抑菌作用最強(qiáng)。2.4.3.2 竹肉球內(nèi)生菌粗多肽對(duì)細(xì)菌的抑菌活性測(cè)定如下圖2.2所示，粗多肽浸提液對(duì)Escherichia coli和Staphyloccocus aureus Rosenbach的抑菌圖，可以看出經(jīng) 30 ℃培養(yǎng)一天后觀察粗多肽浸提液紙片和無(wú)菌蒸餾水處理過(guò)的紙片，發(fā)現(xiàn)兩者都沒(méi)有明顯的抑制效果，說(shuō)明該提取到的粗多肽對(duì) Escherichia coli 和Staphyloccocus aureus Rosenbach 無(wú)明顯的抑制作用。

如圖3.1 所示：圖 3.1 凝膠過(guò)濾層析原理的示意圖Fig 3.1 The Schematic Diagram of Principle of Gel Filtration Chromatography3.3.1.2 凝膠過(guò)濾層析的純化步驟（1）柱材：根據(jù)柱型號(hào)計(jì)算稱取適量的 Sephadex G-25 干粉顆粒，將干膠顆粒用沸水水浴 2 h 除去顆粒中的空氣。然后通過(guò)酸洗和堿洗對(duì)其進(jìn)行消毒處理，最后用無(wú)菌抽濾水將酸堿沖洗干凈。用蒸餾水浸泡，輕輕攪動(dòng)柱材（不能出現(xiàn)氣泡）然后靜置，待柱材沉降后，傾去上層漂浮的顆粒，反復(fù) 4-6 次(Wright J G et al, 2008)。（2）層析柱：將層析柱反復(fù)清洗干凈，與烘箱中干燥備用。（3）裝柱：將層析柱固定在與地面垂直的鐵架臺(tái)上，用夾子將其下端出口封住，將處理好的柱材中的水用 2～2.5 倍柱材體積的 1.1%醋酸緩沖液代替，并輕輕攪拌成懸浮液，然后通過(guò)玻璃棒引流灌入層析柱中，打開(kāi)柱的下端出口，讓柱材自然沉降，若出現(xiàn)柱材斷層和有氣泡等現(xiàn)象就必須重新裝柱。（4）平衡：通過(guò)恒流泵控制流速為 0.8 mL/min，用兩倍柱體積的 1.1%的醋酸緩沖液進(jìn)行平衡。（5）上樣與洗脫：將平衡好的層析柱底端出口打開(kāi)，接通紫外檢測(cè)儀，將粗多肽樣品液 1.5～2 mL 上樣

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 康振生;王曉杰;趙杰;湯春蕾;黃麗麗;;小麥條銹菌致病性及其變異研究進(jìn)展[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年17期

2 白永強(qiáng);;抗菌肽的分類及作用[J];北方牧業(yè);2014年01期

3 馬宏宇;;細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)與抗菌藥物的合理應(yīng)用[J];臨床合理用藥雜志;2011年05期

4 譚瑤;趙清;舒為群;陳浩;;K-B紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年20期

5 朱育菁;陳璐;藍(lán)江林;蘇明星;劉波;;茶葉內(nèi)生菌的分離鑒定及其生防功能初探[J];福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年02期

6 劉曉蓉;張媛媛;;淡竹葉提取物抑菌作用的研究[J];食品科技;2008年12期

7 皮鈺珍;劉長(zhǎng)江;王淑琴;張海濤;;利用層析法純化鹿胎盤多肽的研究[J];食品與發(fā)酵工業(yè);2008年03期

8 王堅(jiān);刁治民;徐廣;肖前青;曾智科;;植物內(nèi)生菌的研究概況及其應(yīng)用[J];青海草業(yè);2008年01期

9 劉璇;時(shí)祥柱;葉秀云;;苦瓜籽中一種抗胰蛋白肽的分離及抗真菌作用觀察[J];福州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年01期

10 李小俊;成麗霞;吳彥彬;邊艷青;;拮抗菌抗菌譜及發(fā)酵液拮抗能力測(cè)定的新方法[J];生物技術(shù);2007年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 李秋實(shí);基于SMRT測(cè)序技術(shù)的藥用植物遺傳序列研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

2 孫龍;兩種鞘翅目昆蟲(chóng)抗菌肽的分離純化與活性研究[D];中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院;2012年

3 陳剛;小麥條銹病區(qū)域流行的相關(guān)性分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

4 高麗鋒;表達(dá)序列標(biāo)簽（ESTs）中開(kāi)發(fā)的SSRs和SNPs標(biāo)記及其應(yīng)用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 趙茜;抗菌肽AWRK6對(duì)體內(nèi)外胰島素分泌影響及其機(jī)制初步研究[D];遼寧大學(xué);2014年

2 賈瑞祥;中國(guó)小麥條銹菌主要流行小種DNA多態(tài)性分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2833456