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黃瓜抗蚜蟲(chóng)相關(guān)蛋白鑒定及功能分析

發(fā)布時(shí)間:2020-09-25 16:10
   黃瓜是我國(guó)重要的蔬菜之一,其產(chǎn)量及栽培面積均位居全球第一。瓜蚜是危害黃瓜生長(zhǎng)的主要害蟲(chóng)之一,其通過(guò)吸食黃瓜生長(zhǎng)所必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和傳播病毒病等方式,嚴(yán)重影響黃瓜生長(zhǎng)、產(chǎn)量、品質(zhì)和效益。目前黃瓜生產(chǎn)上對(duì)瓜蚜的防治仍以化學(xué)農(nóng)藥防控為主,但是化學(xué)農(nóng)藥的使用不可避免的帶來(lái)了包括害蟲(chóng)抗藥性增強(qiáng),環(huán)境污染加劇,蚜蟲(chóng)天敵與授粉益蟲(chóng)受害等問(wèn)題。挖掘黃瓜抗蚜蟲(chóng)基因/蛋白,改良并提高黃瓜抗蚜性,是防控黃瓜蚜蟲(chóng)最有效的途徑。本研究運(yùn)用 iTRAQ(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation,iTRAQ)技術(shù),以抗蚜黃瓜品系'EP6392'為材料,進(jìn)行接蚜蟲(chóng)(接5頭無(wú)翅成蚜)和不接蚜蟲(chóng)處理,接蟲(chóng)6天后取樣分離鑒定黃瓜抗蚜蟲(chóng)蛋白質(zhì);通過(guò)外源茉莉酸處理,研究用80頭無(wú)翅成蚜接蟲(chóng)處理6天后與對(duì)照之間抗蚜性的差異及相關(guān)蛋白質(zhì)基因的表達(dá)。主要研究結(jié)果如下:共得到54個(gè)差異蛋白,其中19個(gè)為上調(diào)蛋白,35個(gè)為下調(diào)蛋白。選取其中9個(gè)可能與黃瓜抗蚜性相關(guān)的蛋白進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)基因表達(dá)檢測(cè),發(fā)現(xiàn)基因表達(dá)趨勢(shì)與蛋白基本相同。通過(guò)GO(Gene Ontology)分析,發(fā)現(xiàn)差異蛋白主要集中在生物過(guò)程中的代謝過(guò)程、細(xì)胞過(guò)程、和單生物體等;所處細(xì)胞位置中的細(xì)胞、細(xì)胞器和高分子配合物等;分子功能中的結(jié)合、催化反應(yīng)和結(jié)構(gòu)分子活動(dòng)等。通過(guò)KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析發(fā)現(xiàn)在黃瓜在受到蚜蟲(chóng)的脅迫后,差異蛋白主要的代謝通路為核糖體代謝、淀粉與蔗糖代謝途徑、類(lèi)黃酮生物合成、谷胱甘肽代謝、苯丙烷生物合成、α-亞麻酸代謝、和碳代謝途徑等。通過(guò)STRING分析,發(fā)現(xiàn)一些差異蛋白之間存在著某些聯(lián)系,如基因共表達(dá)等。外源茉莉酸處理后瓜蚜繁殖量顯著少于未用茉莉酸處理,其中外源茉莉酸處理濃度在1mmol/L時(shí)蚜蟲(chóng)數(shù)最少,說(shuō)明茉莉酸增強(qiáng)了黃瓜的抗蚜性;編碼與茉莉酸合成相關(guān)的差異上調(diào)蛋白12-oxophytodienoate reductase 11的基因Csa2G395815也在不同接蟲(chóng)量處理和不同外源茉莉酸濃度處理后上調(diào)表達(dá)。此外,與乙烯的合成相關(guān)的 1-aminocyclopropane-l-carboxylate oxidase homolog 6-like(1-氨基環(huán)丙烷-1-竣酸氧化酶同源物6)、peroxidase2(過(guò)氧化物酶2)、anthocyanidin3-o-glucosyltransferase 2-like(花青素糖基轉(zhuǎn)移酶)、scopoletin glucosyltransferase-like(東莨菪糖基轉(zhuǎn)移酶)、pathogenesis-related family protein(病因相關(guān)家族蛋白)和 pectinesterase-like(果膠酯酶),一共6個(gè)在蛋白質(zhì)和基因表達(dá)中均上調(diào)表達(dá);與黃酮類(lèi)化合物相關(guān)的2個(gè)蛋白Chalcone-flavonone isomerase family protein(查爾酮-黃酮異構(gòu)酶)和 Flavanone-3-Hydroxylase(黃烷酮-3-羥化酶)在蛋白質(zhì)和基因表達(dá)中均下調(diào)表達(dá)。
【學(xué)位單位】:揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2018
【中圖分類(lèi)】:S436.421.21
【部分圖文】:

抗性蛋白,主流技術(shù),技術(shù)流程,黃瓜


揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文肽的氨基基團(tuán),進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,可同時(shí)比較4種或8種不同樣品中蛋白質(zhì)的相對(duì)或絕對(duì)含量。iTRAQ試劑由三部分組成:報(bào)告基團(tuán)(4標(biāo)實(shí)驗(yàn)相對(duì)分子質(zhì)量分別為115、116和117邋Da;邋8標(biāo)實(shí)驗(yàn)相對(duì)分子質(zhì)量分別為113、114、115、116、117、118、1191邋Da);質(zhì)量平衡基團(tuán)(4標(biāo)實(shí)驗(yàn)相對(duì)分子質(zhì)量分別為31、30、29和28邋Da;邋8標(biāo)實(shí)驗(yàn)分子質(zhì)量分別為32、31、30、29、28、27、26和24Da)和肽反應(yīng)標(biāo)記試劑基團(tuán),形或8種相對(duì)分子質(zhì)量均為145的等量異位標(biāo)簽。iTRAQ試劑標(biāo)記酶解后的肽段,可基酸N端及賴氨酸側(cè)鏈連接的胺標(biāo)記同重元素。在質(zhì)譜圖中,任何一種iTRAQ試劑的不同樣本中的同一蛋白質(zhì)表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比。在串聯(lián)質(zhì)譜中,報(bào)告基團(tuán)、質(zhì)量平團(tuán)和多肽反應(yīng)基團(tuán)之間的鍵斷裂,質(zhì)量平衡基團(tuán)丟失,帶不同同位素標(biāo)簽的同一多肽質(zhì)量為邋114,115,116邋和邋117邋Da邋(八標(biāo)為邋113、114、115、116、117、118、119邋和邋1)的報(bào)告離子,根據(jù)報(bào)告離子的豐度可獲得樣品間相同肽段的定量信息,再經(jīng)過(guò)軟件得到蛋白質(zhì)的定量信息。逡逑

接蟲(chóng),葉片發(fā)生,皺縮,植株


Figure邋3.邋The邋appearance邋contrast邋of‘EP6392’邋and邋4邋JY30’邋under邋80邋aphid邋infection邋after邋5邋weeks逡逑處理6天后,與不接蟲(chóng)的對(duì)照相比,接5頭蚜蟲(chóng)的‘EP6392’,其葉片發(fā)生了萎蔫、逡逑皺縮。如圖4所示:逡逑

黃瓜,結(jié)果分析,蚜蟲(chóng),癥狀


圖7.接0頭(Control)、5頭(乃)、10頭(T2)、20頭(T3)、40頭(T4)蚜蟲(chóng)處理6天后植株受害逡逑癥狀逡逑

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