近年來(lái)貴州省獼猴桃產(chǎn)業(yè)呈噴井式發(fā)展,已成為貴州省重要的扶貧產(chǎn)業(yè)。獼猴桃軟腐病是獼猴桃果實(shí)貯藏期的重要病害,其主要致病菌為葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)。目前針對(duì)獼猴桃軟腐病的防治主要以化學(xué)防治為主,化學(xué)農(nóng)藥雖可有效控制獼猴桃軟腐病的發(fā)生,但存在耐藥性、抗性、環(huán)境污染及農(nóng)藥殘留等諸多問(wèn)題。茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)作為高等植物體內(nèi)廣泛存在的內(nèi)源調(diào)節(jié)激素,在植物生長(zhǎng)發(fā)育和次生代謝方面發(fā)揮著極為重要的作用,目前已有人利用MeJA直接抑制植物病原真菌,且達(dá)到較理想的效果,但MeJA對(duì)獼猴桃軟腐病菌B.dothidea的抑菌活性及作用機(jī)制尚未見相關(guān)研究,阻礙了MeJA作為抑制劑的開發(fā)和實(shí)際應(yīng)用。鑒于此,本研究通過(guò)測(cè)定MeJA對(duì)獼猴桃軟腐病菌B.dothidea的抑菌作用,并進(jìn)一步研究MeJA對(duì)B.dothidea菌絲形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)、呼吸代謝及酶活性、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及遺傳物質(zhì)的影響,開展了MeJA對(duì)獼猴桃軟腐病菌的防治及果實(shí)品質(zhì)的影響,為MeJA在獼猴桃上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.采用組織分離法對(duì)獼猴桃病果進(jìn)行分離,以柯赫氏法則測(cè)定致病性,獲得一株致病力較高的菌株。通過(guò)形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)rDNA-ITS序列測(cè)定,該菌株與B.dothidea同源性達(dá)100%。因此,確定本試驗(yàn)分離所獲得的獼猴桃軟腐病的致病菌株為B.dothidea。2.采用菌絲生長(zhǎng)速率法、稱重法、孢子萌發(fā)法測(cè)定不同濃度MeJA對(duì)B.dothidea菌絲生長(zhǎng)、菌絲生長(zhǎng)量及孢子萌發(fā)的影響。結(jié)果顯示,MeJA對(duì)獼猴桃軟腐病菌B.dothidea菌絲生長(zhǎng)有抑制作用,EC_(50)為0.2327 mmol/L;0.80 mmol/L MeJA對(duì)B.dothidea菌絲生長(zhǎng)量抑制率達(dá)86.51%;同時(shí)MeJA對(duì)B.dothidea孢子萌發(fā)的具有抑制作用,濃度為0.80 mmol/L時(shí)抑制率達(dá)83.74%。通過(guò)掃面電鏡及透射電鏡觀察,0.80 mmol/L MeJA處理B.dothidea菌絲后,可導(dǎo)致菌絲細(xì)胞細(xì)胞壁溶解、細(xì)胞核及線粒體增多且形狀變得不規(guī)則、細(xì)胞內(nèi)空腔增加,從而破壞B.dothidea菌絲細(xì)胞結(jié)構(gòu)達(dá)到殺死病原菌的作用。3.利用碘乙酸、丙二酸和磷酸鈉三種真菌典型呼吸抑制劑同MeJA進(jìn)行疊加使用,通過(guò)MeJA與呼吸抑制劑疊加率來(lái)判斷MeJA抑制病原真菌的呼吸途徑,并測(cè)定MeJA處理后呼吸代謝酶活性。結(jié)果表明,MeJA和丙二酸疊加使用,疊加率最低,認(rèn)為MeJA通過(guò)三羧酸循環(huán)抑制獼猴桃軟腐病原菌呼吸代謝;而MeJA與碘乙酸疊加率較高,提示糖酵解途徑可能也受到MeJA的影響;MeJA處理對(duì)細(xì)胞代謝過(guò)程中ATP能量消耗與合成、代謝酶活琥珀酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶的產(chǎn)生均有影響,MeJA抑制琥珀酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶活性,干擾三羧酸循環(huán),抑制ATP的合成,進(jìn)而導(dǎo)致線粒體內(nèi)ATP衰竭,達(dá)到殺死病原菌的效果。4.通過(guò)電導(dǎo)法、紫外分光光度法測(cè)定菌絲培養(yǎng)液電導(dǎo)率、蛋白質(zhì)及核酸相對(duì)泄漏度;采用考馬斯亮藍(lán)法、CTAB法測(cè)定MeJA對(duì)B.dothidea蛋白質(zhì)及DNA含量,探究MeJA處理B.dothidea對(duì)菌絲細(xì)胞膜功能及遺傳物質(zhì)的影響。結(jié)果顯示,MeJA處理可引起菌絲細(xì)胞膜相對(duì)電導(dǎo)率、蛋白質(zhì)與核酸相對(duì)泄漏度升高,隨著時(shí)間延長(zhǎng),作用效果越明顯;且MeJA處理B.dothidea后菌絲細(xì)胞壁β-1,3-葡聚糖酶活性增強(qiáng),細(xì)胞壁幾丁質(zhì)主要組分N-乙酰氨基葡萄糖含量升高;MeJA處理后B.dothidea體內(nèi)蛋白質(zhì)、DNA含量明顯降低,可能直接抑制或干擾病原菌DNA及蛋白質(zhì)的合成。5.為明確MeJA對(duì)獼猴桃軟腐病田間防效及果實(shí)品質(zhì)的影響,在獼猴桃不同生長(zhǎng)期利用MeJA進(jìn)行處理。田間試驗(yàn)結(jié)果顯示:采前一個(gè)月用0.5 mmol/L MeJA浸果對(duì)獼猴桃軟腐病控制效果較好,防效達(dá)到77.70%;且MeJA處理可有效改善果實(shí)外觀品質(zhì),提高果實(shí)維生素C、可溶性固形物含量,MeJA處理可提高果實(shí)硬度,明顯延緩果實(shí)可溶性固形物、可溶性糖含量的上升速率,降低維生素C的損失率,從而達(dá)到改善獼猴桃果實(shí)貯藏性能。本研究表明,MeJA處理可以直接抑制B.dothidea的生長(zhǎng),破壞菌絲細(xì)胞功能及結(jié)構(gòu),抑制DNA和蛋白質(zhì)的合成,0.5 mmol/L MeJA對(duì)田間獼猴桃軟腐病防效達(dá)到77.70%,且能提高獼猴桃果實(shí)品質(zhì),改善貯藏性能。研究結(jié)果可為MeJA在獼猴桃上的應(yīng)用提供理論參考。
【學(xué)位單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S436.634.1
【部分圖文】：

有 0.00（CK）、0.8 mmol/L MeJA 的 PDA 培養(yǎng)基上取直徑為 5 mm 的菌餅，用 2.5%戊二醛，磷酸緩沖4℃），1%鋨酸固定液固定 2-3 h。乙醇梯度脫水，埋處理。3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色法染色后，對(duì)切。每個(gè)樣品至少觀察 10 份超薄切片。析定將分離純化的菌株回接到健康獼猴桃果實(shí)上，結(jié)果發(fā)病，且發(fā)病癥狀與田間自然發(fā)病癥狀相同，依次實(shí)上病斑進(jìn)行再分離得到的菌株在 PDA 培養(yǎng)基上的表明所分離得到的病原菌是獼猴桃軟腐病的病原菌，致病性相對(duì)較強(qiáng)，作為后續(xù)研究菌株。

州大學(xué) 2019 碩士論文 茉莉酸甲酯對(duì) Botryosphaeria dothidea 的抑菌作用及其代謝酶活性的影2 病原菌形態(tài)特征RF-2 菌落初期白色，棉絮狀，培養(yǎng) 3~4 d 后，菌落中央逐漸轉(zhuǎn)為墨綠色散，后再轉(zhuǎn)為黑色，邊緣不整齊，經(jīng) 72 h 生長(zhǎng)菌落直徑達(dá) 70 mmA/B），分生孢子無(wú)色，無(wú)隔膜，壁薄，外壁光滑，長(zhǎng)橢圓形，平均寬 5.88 (4) μm，平均長(zhǎng)度 19.59(17.86～21.43) μm (圖 2.2-C)。A B C

2.2 RF-2 病原菌菌絲形態(tài)及孢logy of mycelia and spores of RF/ITS5對(duì)菌株RF-2進(jìn)行 PCR的片段長(zhǎng)度分別為 523 bp對(duì)，菌株 RF-2 與葡萄座腔菌.1、KF 293916.1）同源性達(dá)于同一分支，進(jìn)化距離最近 為 B. dothidea（圖 2.4）。

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本文編號(hào)：2811790