發(fā)布時間：2020-09-01 12:05

　　 贛州臍橙是亞洲最大的臍橙生產(chǎn)基地,種植面積150萬畝,臍橙產(chǎn)量130萬噸,產(chǎn)值超過100億元。多年來,橘小實蠅在贛州臍橙基地發(fā)生,呈加重勢態(tài),嚴(yán)重威脅臍橙的生產(chǎn)。橘小實蠅體內(nèi)存在豐富的內(nèi)生菌,對種群在基地的發(fā)生發(fā)展起重要調(diào)節(jié)作用。我們以贛州臍橙基地的橘小實蠅為研究對象,通過培養(yǎng)基培養(yǎng)與高通量Illumina Hi Seq測序技術(shù),探索雌雄成蟲腸道和生殖系統(tǒng)內(nèi)生菌的種類和組成,并比較它們之間的差異。主要結(jié)果如下:對LB培養(yǎng)基培養(yǎng)出的菌群,進(jìn)行PCR測序技術(shù)鑒定,得到橘小實蠅腸道內(nèi)生菌50株,分屬4門12屬。4門分別為變形菌門Proteobacteria,放線菌門Actinobacteria,厚壁菌門Firmicutes和擬桿菌門Bacteroidetes。12屬為金黃桿菌屬Chryseobacterium,葡萄球菌屬Staphylococcus,不動桿菌屬Acinetobacter,芽孢桿菌屬Bacillus,擬桿菌屬Bacteroides,蒼白桿菌屬Ochrobactrum,腸桿菌屬Enterobacter,鞘氨醇桿菌屬Sphingobacterium,鏈霉菌屬Streptomyces,微桿菌屬Microbacterium,鞘氨醇單胞菌屬Sphingomonas和微球菌屬Micrococcus。其中,鞘氨醇單胞菌屬、鞘氨醇桿菌屬、微桿菌屬、鏈霉菌屬和微球菌屬為雌性成蟲特有;金黃桿菌屬和擬桿菌屬為雄性成蟲特有。橘小實蠅生殖系統(tǒng)內(nèi)生菌39株,分屬4門11屬。4門為變形菌門Proteobacteria,放線菌門Actinobacteria,厚壁菌門Firmicutes和擬桿菌門Bacteroidetes;11屬為金黃桿菌屬Chryseobacterium,不動桿菌屬Acinetobacter,芽孢桿菌屬Bacillus,擬桿菌屬Bacteroides,蒼白桿菌屬Ochrobactrum,假單胞菌屬Pseudomonas,鞘氨醇桿菌屬Sphingobacterium,微桿菌屬Microbacterium,微球菌屬Micrococcus,無色桿菌屬Achromobacter和劍菌屬Ensifer。其中,無色桿菌屬、鞘氨醇桿菌屬、劍菌屬、微球菌屬和微桿菌屬為雌性成蟲特有;假單胞菌屬和擬桿菌屬為雄性成蟲特有。高通量Illumina Hi Seq測序技術(shù),從橘小實蠅雌性腸道中分離出3787條不同遺傳序列,分屬13門2518屬,腸桿菌屬Enterobacter,克呂沃氏菌屬Kluyvera和埃希氏菌屬-志賀氏菌屬Escherichia-Shigella為優(yōu)勢菌屬,分別占總細(xì)菌數(shù)的40.3%,19.4%,和3.2%。雄性腸道中分離出3607條不同遺傳序列,分屬50門2357屬,腸桿菌屬Enterobacter,亞菌屬Commensalibacter和周游球菌屬Vagococcus為優(yōu)勢菌屬,占總細(xì)菌數(shù)的28.3%,23.2%和15.2%。此外,雄性腸道特有的序列有1685條,雌性腸道內(nèi)特有的序列有1865條,兩者共同具備的序列有1922種,重復(fù)率達(dá)52.0%。從橘小實蠅雌性生殖系統(tǒng)中分離出3759條不同遺傳序列,分屬44門2331屬,腸桿菌屬Enterobacter,周游球菌屬Vagococcus和埃希氏菌屬-志賀氏菌屬EscherichiaShigella為優(yōu)勢菌屬,分別占總細(xì)菌數(shù)的38.7%,12.9%和8.1%。雄蟲生殖系統(tǒng)中分離出4125條不同遺傳序列片段,分屬38門2715屬,腸桿菌屬Enterobacter,克呂沃氏菌屬Kluyvera和周游球菌屬Vagococcus為優(yōu)勢菌屬,占總細(xì)菌數(shù)的15.6%,14.5%和13.3%。其中,雄性生殖系統(tǒng)特有的序列有2314條,雌性生殖系統(tǒng)內(nèi)所特有的序列有1948條,它們之間共同具備的序列有1811條,重復(fù)率達(dá)45.9%。研究結(jié)果初步明確了贛南臍橙基地橘小實蠅成蟲腸道和生殖系統(tǒng)內(nèi)生菌的種類、組成與結(jié)構(gòu)特征,為利用微生物農(nóng)藥打破該類害蟲腸道和生殖系統(tǒng)內(nèi)生菌的平衡,降低橘小實蠅種群在基地的適生能力,提供基礎(chǔ)信息。
【學(xué)位單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S436.66
【部分圖文】：

且粗糙；HNCC54 菌落呈乳白色，菌落濕潤且光滑，在顯微鏡下微觀觀察菌呈現(xiàn)圓形。雄性腸道的可培養(yǎng)細(xì)菌，菌落均呈圓形，其中 HNXC41 與 HN顏色，形態(tài)，干濕等性狀相近，HNXC41 革蘭氏染色反應(yīng)呈現(xiàn)陰性，HNXC染色反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。其它菌落特征如表 2-1 和圖 2-1 所示。表 2-1 橘小實蠅成蟲腸道細(xì)菌特征Table2-1 Characteristics of intestinal bacteria in B. dorsalis adult注：HNCC 為雌性腸道，HNXC 為雄性腸道。編菌株來源菌落顏色菌落形態(tài)菌落隆起度菌落邊緣形狀菌落表面狀態(tài)菌落光澤菌落干濕菌落透明度8 雌性 灰橘黃色 圓形 隆起 整齊 光滑 有光澤 濕潤 不透明 15 雌性 白色 圓形 隆起 整齊 粗糙 有光澤 干燥 不透明 19 雌性 檸檬亮黃 圓形 隆起 整齊 光滑 有光澤 濕潤 不透明 33 雌性 蛋黃 圓形 隆起 整齊 光滑 有光澤 濕潤 不透明 35 雌性 粉色 橢圓 隆起 整齊 光滑 有光澤 濕潤 不透明 54 雌性 乳白 圓形 隆起 整齊 光滑 有光澤 濕潤 不透明 C2 雄性 蛋黃 圓形 隆起 整齊 光滑 有光澤 濕潤 不透明 10 雄性 黃色 圓形 扁平 整齊 光滑 有光澤 濕潤 不透明 16 雄性 乳白 圓形 扁平 整齊 粗糙 有光澤 干燥 不透明 21 雄性 芒果乳黃 圓形 隆起 整齊 光滑 有光澤 濕潤 不透明 41 雄性 乳黃 圓形 隆起 整齊 光滑 有光澤 濕潤 不透明 45 雄性 淡黃 圓形 隆起 整齊 光滑 有光澤 濕潤 不透明 55 雄性 偏黃 圓形 隆起 整齊 光滑 有光澤 干燥 不透明

Microbacterium sp.，Streptomyces spChryseobacterium sp.，Bacteroides sp.為雄表2-3 可培養(yǎng)Table 2-3 Cultivable bacteria門Phylum屬GenusProteobacteria Ochrobactrum sp. Proteobacteria Enterobacter sp. Proteobacteria Acinetobacter sp. Proteobacteria Sphingomonas sp. Bacteroidetes Chryseobacterium spBacteroidetes Sphingobacterium spBacteroidetes Bacteroides sp. Actinobacteria Microbacterium sp. Actinobacteria Streptomyces sp. Actinobacteria Micrococcus sp. Firmicutes Bacillus sp. Firmicutes Staphylococcus sp. Unassigned Unassigned 注：FI 為雌性腸道，MI 為雄性腸道。100%UnassignedMicrococcus sp.

13圖 2-3 橘小實蠅雌雄成蟲腸道細(xì)菌 16SrRNA 系統(tǒng)發(fā)育樹Fig 2-3 Phylogenetic tree of bacteria from the intestinal tract of B. dorsalis female and male based on 16SrRNAsequence

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本文編號：2809708