【摘要】：由稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病(Rice blast)是水稻上的主要病害之一,每年會給水稻生產造成巨大經濟損失。稻瘟菌作為一種模式病原真菌,人們對其生長循環(huán)、發(fā)病規(guī)律以及流行特征都有比較清楚的了解。通過這些特征,人們可以在分子水平上對稻瘟病開發(fā)新的防控策略。在前期研究中表明,稻瘟菌ATP依賴型Lon蛋白酶(MAP1)可能通過調控互作蛋白進而調控稻瘟菌的致病性。因此探究MAP1互作蛋白的功能和作用對于揭示稻瘟菌致病過程具有重要意義。Rpl21(Ribosomal Protein L21)就是和MAP1互作的蛋白之一。通過農桿菌介導的遺傳轉化方法對該基因進行敲除,獲得了其敲除突變體△rpl21.為了進行基因的定位,我們也成功獲得了亞細胞定位突變體,結果發(fā)現(xiàn)目的基因定位在細胞膜或線粒體上。通過對野生型和突變體生物學表型進行分析,發(fā)現(xiàn)突變體對SDS更為敏感,分生孢子梗變長,孢子量增多,孢子萌發(fā)提前,附著胞生成率增多,對水稻的致病力增強,在水稻葉鞘菌絲擴展的更廣。通過原核表達和蛋白純化技術,我們得到了目的蛋白。將蛋白注射煙草葉片中,煙草葉片發(fā)生了過敏性壞死反應。經過以上的研究證明,RPL21基因在調控稻瘟菌的菌絲生長,分生孢子的形成致病性的生物學性狀方面起著重要的作用。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S435.111.41
【圖文】：

第 1 章 文獻綜述頂端便會開始膨大形成附著胞。附著胞成熟后會有黑色素沉積[17,18]，黑色素允許水分子自由通過但是會阻止生物大分子通過，這使得附著胞擁有巨大的膨壓[19]。之后附著胞產生侵染釘，巨大的膨壓使侵染釘侵入水稻葉片[20-22]。侵染釘侵入細胞后開始形成菌絲，菌絲在細胞內擴展，形成病斑。大量的分生孢子會再從病斑處釋放出來，再次去侵染周邊的水稻[23]。到秋冬季節(jié)，稻瘟菌以分生孢子或者菌絲體的形式在病稻草、谷粒上過冬，第二天稱為水稻的初侵染源[24]。

圖 1.2 核糖體結構Fig 1.2 Ribosome structure白的分類與功能中，核糖體蛋白質含有 40S 小亞基和 60S 大亞包括 L1-L49[63,64]。核糖體可以促進 rRNA 的折蛋白質的合成效率。核糖體不僅能參與蛋白質細胞的分裂增殖和凋亡都離不開核糖體的調節(jié)致細胞代謝失常、細胞生長停滯甚至死亡[69]。白 L21 L21（Ribosomal Protein L21，Rpl21）是核糖0,71]。迄今為止，多種生物的 RPL21 基因得以克

2、向 2mL EP 管的中央先后兩次加入 PEG 轉化液（60%PEG4000 和 KTC比例為 2:1）500μL，注意混勻。3、置于 28℃培養(yǎng)箱中 30min。4、將 200μL 混合培養(yǎng)液用微量移液器轉移至無任何抗生素的固體 TB3 平板中，用涂布棒輕輕地滑動使整個平板被混合液鋪滿即可，晾干，然后將平板放置于 28℃中過夜。5、再倒入薄薄的一層含 200μg/mL 潮霉素，400μg/mL 頭孢霉素的固體 TB3培養(yǎng)基，凝固后將其置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)。挑取 TB3 上層培養(yǎng)基的轉化子于含 200μg /mL 潮霉素的 PDA 培養(yǎng)，PCR驗證抗潮霉素的菌株 DNA。2.2.8 構建 RPL21 敲除載體和互補載體2.2.8.1 構建 RPL21 敲除載體

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 李宏宇,魯國東,王明海,王宗華;稻瘟病菌微波誘發(fā)突變體的分析[J];菌物系統(tǒng);2003年04期

2 周益軍,范永堅,吳淑華,陸振曉,程兆榜;稻瘟病菌生理小種離體接種鑒定和致病性人工誘變研究[J];江蘇農業(yè)研究;1999年01期

相關博士學位論文 前1條

1 李健;線粒體ATP-Lon蛋白酶（MAP1）參與稻瘟菌致病和自身防護的分子證據[D];吉林大學;2013年

相關碩士學位論文 前2條

1 李前前;稻瘟菌候選效應蛋白的鑒定及功能初探[D];揚州大學;2015年

2 李雪松;粟酒裂殖酵母核糖體蛋白L32-1和L32-2功能的初步研究[D];南京師范大學;2013年

本文編號：2785850