【摘要】：翻譯控制腫瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)是一種序列上高度保守的蛋白,廣泛存在于動(dòng)物、植物以及真菌體內(nèi),具有多種生物功能,包括調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的進(jìn)程和惡性轉(zhuǎn)移、鈣結(jié)合蛋白、細(xì)胞外組胺釋放蛋白、抗凋亡等。黑腹果蠅(Drosophila rrelangaster)因其清晰的遺傳背景以及便捷的實(shí)驗(yàn)操作,被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)等研究領(lǐng)域,是遺傳學(xué)研究的重要模式生物。我們實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),小菜蛾的溴氰菊酯抗性品系中TCTP的表達(dá)水平與敏感品系相比明顯提高,但是TCTP是否與溴氰菊酯抗性相關(guān),目前還沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道。本研究對(duì)TCTP在溴氰菊酯、對(duì)硫磷和西維因應(yīng)激中的作用及其與溴氰菊酯耐受的關(guān)系進(jìn)行了初步探索,主要結(jié)果如下:1)用不同濃度的溴氰菊酯、對(duì)硫磷和西維因分別處理果蠅細(xì)胞48 h,RT-PCR測(cè)定果蠅Kc細(xì)胞中TCTP的表達(dá)水平。結(jié)果表明:在不同種類殺蟲(chóng)劑的處理下,細(xì)胞內(nèi)TCTP基因的表達(dá)水平均有升高,其中溴氰菊酯的影響最明顯。接著選取適宜濃度的溴氰菊酯,分別將果蠅細(xì)胞處理0h,12 h,24 h,36 h,48 h,60 h,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在處理24 h時(shí)TCTP的表達(dá)量最高。2)為了進(jìn)一步驗(yàn)證TCTP在溴氰菊酯應(yīng)激下對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用,我們克隆TCTP基因的全長(zhǎng)并轉(zhuǎn)染進(jìn)果蠅細(xì)胞,使用RT-PCR技術(shù)和Western blot來(lái)檢測(cè)其轉(zhuǎn)染率,并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。結(jié)果表明:成功過(guò)表達(dá)的果蠅細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞相比細(xì)胞的凋亡率明顯下降,即對(duì)溴氰菊酯的抗性有明顯的提高;而用dsRNA敲低TCTP在果蠅細(xì)胞中的表達(dá),細(xì)胞的凋亡率顯著上升,說(shuō)明對(duì)溴氰菊酯的抗性明顯下降。3)將溴氰菊酯抗性和敏感性品系小菜蛾幼蟲(chóng)分別提取RNA,并解剖頭、中腸、脂肪體和肌肉四種組織提RNA,用RT-PCR檢測(cè)TCTP基因的表達(dá)量,結(jié)果顯示抗性品系整體TCTP表達(dá)量高于敏感品系,且頭和脂肪體的TCTP基因表達(dá)量明顯高于敏感性品系,抗性品系中TCTP呈現(xiàn)組成型高水平表達(dá)。上述結(jié)果表明:TCTP基因表達(dá)水平與昆蟲(chóng)對(duì)殺蟲(chóng)劑耐受之間存在一定的聯(lián)系。TCTP基因的高表達(dá)能增強(qiáng)果蠅Kc細(xì)胞對(duì)溴氰菊酯的抗性能力,抗溴氰菊酯品系小菜蛾細(xì)胞中TCTP組成型高表達(dá)。因此,我們推論TCTP基因可能是與溴氰菊酯抗藥性相關(guān)的候選基因,但是關(guān)于TCTP在溴氰菊酯抗藥性中的作用機(jī)理仍需要深入的探究。
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S433
【圖文】：

將ＲＮＡ用一步法反轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ進(jìn)行ＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，處理不同逡逑時(shí)間的細(xì)胞的ｒｃｒｐ的表達(dá)量具有明顯的差異，并且和對(duì)照組相比ｒｃｒｐ表達(dá)量逡逑顯著提高，并且在２４邋ｈ時(shí)ＴＣ２Ｔ的表達(dá)量最高（圖２．２）。逡逑４０邋ｆ邐＊逡逑３．５邋－邐丨逡逑■邐■逡逑■邋－邋ｉ逡逑ｍｉｌＩＩ邋ａ逡逑0邐１２邐２４邐３６邐４８邐６０逡逑Ｔｉｍｅ邋ｏｆ邋ｄｒｕｇ邋ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ邋（ｈ）逡逑圖２．２相同濃度條件下溴氰菊酯誘導(dǎo)不同時(shí)間后ｒＣ７Ｔ基因的表達(dá)水平逡逑＊邋代表／？＜0．0５。逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋ｍＲＮＡ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＴＣＴＰ邋ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｗｉｔｈ邋ＤＭ邋ｆｏｒ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｔｉｍｅｓ逡逑＊邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ邋ｐ＜０．０５．逡逑２．３．３不同濃度溴氰菊酯處理細(xì)胞的存活率逡逑分別用不同濃度的溴氰菊酯處理細(xì)胞２４邋ｈ，然后使用流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)不同逡逑濃度刺激下細(xì)胞的凋亡率。結(jié)果顯示，在２０邋ｐｐｍ濃度時(shí)，細(xì)胞的凋亡率最小（圖逡逑２．３），該濃度處理下基因ｒＣ７Ｐ的表達(dá)量最高，預(yù)示７ＩＴＰ在溴氰菊酯耐受中發(fā)逡逑揮作用。逡逑１４逡逑

將ＲＮＡ用一步法反轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ進(jìn)行ＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，處理不同逡逑時(shí)間的細(xì)胞的ｒｃｒｐ的表達(dá)量具有明顯的差異，并且和對(duì)照組相比ｒｃｒｐ表達(dá)量逡逑顯著提高，并且在２４邋ｈ時(shí)ＴＣ２Ｔ的表達(dá)量最高（圖２．２）。逡逑４０邋ｆ邐＊逡逑３．５邋－邐丨逡逑■邐■逡逑■邋－邋ｉ逡逑ｍｉｌＩＩ邋ａ逡逑0邐１２邐２４邐３６邐４８邐６０逡逑Ｔｉｍｅ邋ｏｆ邋ｄｒｕｇ邋ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ邋（ｈ）逡逑圖２．２相同濃度條件下溴氰菊酯誘導(dǎo)不同時(shí)間后ｒＣ７Ｔ基因的表達(dá)水平逡逑＊邋代表／？＜0．0５。逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋ｍＲＮＡ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＴＣＴＰ邋ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｗｉｔｈ邋ＤＭ邋ｆｏｒ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｔｉｍｅｓ逡逑＊邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ邋ｐ＜０．０５．逡逑２．３．３不同濃度溴氰菊酯處理細(xì)胞的存活率逡逑分別用不同濃度的溴氰菊酯處理細(xì)胞２４邋ｈ，然后使用流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)不同逡逑濃度刺激下細(xì)胞的凋亡率。結(jié)果顯示，在２０邋ｐｐｍ濃度時(shí)，細(xì)胞的凋亡率最�。▓D逡逑２．３），該濃度處理下基因ｒＣ７Ｐ的表達(dá)量最高，預(yù)示７ＩＴＰ在溴氰菊酯耐受中發(fā)逡逑揮作用。逡逑１４逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊立敏;姚睿原;郭志新;朝格圖;其布日;鄭旭;鮑文蕾;王志鋼;;內(nèi)蒙古白絨山羊翻譯控制腫瘤蛋白(TCTP)基因克隆及組織表達(dá)特性分析[J];生物技術(shù)通報(bào);2014年07期

2 李瑾;李鳳良;焦東旭;李娜;程羅根;;溴氰菊酯脅迫下小菜蛾幼蟲(chóng)體內(nèi)差異表達(dá)蛋白的分析[J];昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2014年01期

3 顏培娥;何先弟;;翻譯控制腫瘤蛋白功能的研究進(jìn)展[J];中國(guó)全科醫(yī)學(xué);2013年06期

4 孟祥志;關(guān)于昆蟲(chóng)抗藥性的發(fā)展機(jī)理及殺蟲(chóng)劑互作增效的探討[J];長(zhǎng)春大學(xué)學(xué)報(bào);2004年02期

5 曾曉們,于彩虹,高希武;德國(guó)小蠊抗性及敏感品系羧酸酯酶生化特征比較研究[J];中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志;2004年02期

6 蘭雨,楊平地;泛素-蛋白酶體通路在凋亡調(diào)控中的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);2001年03期

7 葉炳輝,朱昌亮;昆蟲(chóng)抗藥性的形成機(jī)理及其治理[J];衛(wèi)生殺蟲(chóng)藥械;2001年01期

8 唐振華;我國(guó)昆蟲(chóng)抗藥性研究的現(xiàn)狀及展望[J];昆蟲(chóng)知識(shí);2000年02期

9 程羅根,李鳳良,王蔭長(zhǎng),陳之浩;小菜蛾對(duì)殺螟丹抗藥性的生化遺傳研究[J];南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1998年03期

10 吳金泉;大蜂螨的抗藥性及其研究方向[J];蜜蜂雜志;1998年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 李兵;家蠶和野桑蠶對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥抗性的研究[D];蘇州大學(xué);2009年

2 陶黎明;昆蟲(chóng)抗藥性及其治理對(duì)策的研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

本文編號(hào)：2715948