本文關鍵詞：糖胺聚糖在膿毒癥中內(nèi)皮糖萼保護作用的研究

  更多相關文章： 膿毒癥 糖萼 肝素 乙酰肝素酶 基質(zhì)金屬蛋白酶-9 舒洛地特

【摘要】：膿毒癥又稱全身炎癥反應綜合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS),是重癥監(jiān)護室位居第一的致死病癥。膿毒癥發(fā)病原因多為嚴重創(chuàng)傷、燒傷、器官移植或大手術之后帶來的細菌、真菌、支原體、病毒等病原微生物所引起的感染,進而發(fā)展成為系統(tǒng)性炎癥反應、免疫失控和凝血功能障礙的復雜性綜合病癥。炎癥反應、免疫失控和凝血功能障礙三者相互作用又可導致多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome, MODS),最終導致患者死亡。膿毒癥發(fā)病有逐年上升趨勢,全球每年大約新增一千九百萬例膿毒癥患者。膿毒癥的死亡率超過四分之一。膿毒癥發(fā)病率高且發(fā)病機制復雜,其發(fā)病迅速,病程進展快,目前無有效的治療手段,膿毒癥和膿毒性休克已成為重癥醫(yī)學面臨的首要難題。膿毒癥中內(nèi)皮細胞糖萼的破壞是病理進程中的重要環(huán)節(jié)。血管內(nèi)皮糖萼的結構被破壞之后,其功能缺失。首先,血管內(nèi)皮糖萼的屏障功能削弱或喪失,隱藏在其中的多種信號分子和酶也同時喪失；其次,血管內(nèi)皮糖萼對內(nèi)皮細胞的保護作用遭到破壞,糖萼的機械應力轉導功能被削弱。之后,一系列病理改變出現(xiàn),包括血管通透性增加,水腫的發(fā)生,內(nèi)皮細胞與白細胞的粘附,凝血系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)的失衡與血管緊張度降低等。肝素(Heparin,HP)和低分子肝素在膿毒癥的治療中已有多年臨床實踐經(jīng)驗,主要是發(fā)揮抗凝作用。鑒于糖胺聚糖是內(nèi)皮糖萼的主要成分,膿毒癥時外源糖胺聚糖對膿毒癥時損傷糖萼的保護作用尚無系統(tǒng)的研究。本課題擬考察肝素及其衍生物以及舒洛地特(Sulodexide, SLX)干預對膿毒癥時糖萼破壞因素以及糖萼破壞情況的影響,以及對心臟、小腸和腦部糖萼損傷的保護作用,以闡明糖胺聚糖類藥物在膿毒癥中的治療作用及其機制。主要研究內(nèi)容包括：1.建立小鼠膿毒癥生存率模型,考察HP及其衍生物(包括SST0001, M402, ROH),乙酰肝素,SLX對小鼠膿毒癥28天生存率的影響。其中ROH, HP, SLX可顯著提高膿毒癥小鼠的生存率。選擇這三者開展后續(xù)研究。2.建立小鼠膿毒癥模型,用ELISA法檢測HP、ROH和SLX干預對膿毒癥小鼠血清HPA和MMP-9這兩個糖萼破壞因素、HS和Syndecan-1這兩種糖萼脫落標志物的含量及時相變化的影響。2.1膿毒癥時小鼠血清HPA含量變化以及糖胺聚糖對此影響。在膿毒癥時,小鼠HPA血清含量在造模后3-12h與對照組相比顯著下降(P0.05),且3h-12h時間段內(nèi)小鼠HPA血清含量持續(xù)下降(P0.05)。HP組在造模后3 h,9 h,12h顯著低于膿毒癥模型組(P0.05),造模后6h與膿毒癥模型組差異不顯著(P0.05)；ROH組在造模后3 h,6,h 12h點明顯低于膿毒癥模型組(P0.05),在造模后9h與膿毒癥模型組差異不顯著(P0.05)；SLX組在造模后3h,6h,9h,12h與膿毒癥模型組差異不顯著(P0.05)。這一反常結果經(jīng)多次重復實驗確認,原因有待闡明。膿毒癥時小鼠血清MMP-9的含量在3小時顯著上升(P0.05),6小時達峰值,繼而回落,在造模后9h和12h與對照組無顯著差異(P0.05)。在造模后3h,HP組和ROH組與模型組相比顯著下降(P 0.05), SLX組無顯著性差異(P0.05)；造模6h后,HP組、ROH組和SLX組與模型組相比顯著下降(P0.05)。這表明肝素、ROH和SLX可以顯著抑制膿毒癥中MMP-9的表達。2.3膿毒癥時小鼠血清HS含量變化以及糖胺聚糖對此影響。膿毒癥時小鼠血清HS含量在造模3h-12h的時間段內(nèi)與對照組相比顯著上升(P0.05),說明糖萼損傷已經(jīng)發(fā)生。HP、ROH和SLX組在造模后3h-12h時間段內(nèi)小鼠血清HS含量與模型組相比,顯著下降(P0.05),但仍舊高于正常組。HS是由HPA水解糖萼產(chǎn)生,雖然在造模后3-12小時,膿毒癥小鼠血清HPA含量始終低于正常對照組,但從后續(xù)實驗免疫組化的結果來看,膿毒癥小鼠在心臟、小腸、腦組織水平表達比正常對照組明顯上升,說明組織中的HPA可以起到破壞糖萼的作用,因此在血清中可以檢測到糖萼脫落標志物HS的含量上升。2.4膿毒癥時小鼠血清Syndecan-1含量變化以及糖胺聚糖對此影響。膿毒癥時小鼠血清Syndecan-1含量在造模3h-12h的時間段內(nèi)與對照組相比顯著上升(P0.05),說明糖萼損傷已經(jīng)發(fā)生,膿毒癥小鼠血清Syndecan-1含量在造模后3-9h持續(xù)上升,9h達峰值,繼而下降,12h仍高于正常對照組,(P0.05)。HP組在3h、6h與模型組相比無顯著性差異(P0.05)；9h與模型組相比,顯著下降(P0.05),12h無顯著性差異(P0.05)。ROH組在3h明顯高于模型組(P0.05),6h與模型組相比無顯著性差異(P0.05),9h、12h與模型組相比無顯著性差異(P0.05)。SLX組在3h、6h明顯高于模型組(P0.05),在9h、12h與模型組相比無顯著性差異(P0.05)3.糖胺聚糖對膿毒癥小鼠心臟損傷的保護作用。HE染色結果顯示,膿毒癥模型小鼠室壁局部心外膜下心肌細胞壞死、鈣化,HP、SLX、ROH干預之后,炎癥狀況減輕。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)膿毒癥小鼠心臟主動脈內(nèi)皮細胞糖萼破壞明顯；HP、SLX、ROH干預之后,心臟主動脈內(nèi)皮細胞糖萼損傷有不同程度的減輕。三者對膿毒癥小鼠心臟保護作用的順序為：SLXHPROH。免疫組化結果表明,膿毒癥小鼠心臟組織中HPA, MMP-9的表達與對照組相比表達明顯增多,而HP、SLX、ROH對這兩種酶蛋白在心臟組織中的表達有抑制作用。4.糖胺聚糖對膿毒癥小鼠小腸損傷的保護作用。HE染色結果顯示,膿毒癥模型小鼠小腸大量腸絨毛脫落,粘膜固有層血管擴張、充血,局部大范圍腸粘膜全層壞死,HP、SLX、ROH干預之后,上述炎癥狀況減輕。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)膿毒癥小鼠小腸血管內(nèi)皮細胞糖萼破壞明顯；HP、SLX、ROH干預之后,小腸血管內(nèi)皮細胞糖萼損傷有不同程度的減輕。三者對膿毒癥小鼠小腸保護作用的順序為SLXROHHP。免疫組化結果表明,膿毒癥小鼠小腸中HPA,MMP-9的表達與對照組相比表達明顯增多,而HP、SLX、ROH對兩種酶蛋白在小腸中的表達有抑制作用。5.糖胺聚糖對膿毒癥小鼠大腦損傷的保護作用。HE染色結果顯示,膿毒癥模型小鼠大腦皮層區(qū)域與對照組相比無明顯病理學改變,而海馬區(qū)神經(jīng)元腫脹,部分神經(jīng)元壞死。HP、SLX、ROH干預之后,海馬區(qū)炎癥狀況減輕。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)膿毒癥小鼠大腦皮層內(nèi)皮細胞糖萼破壞明顯；HP、SLX、ROH干預之后,大腦皮層內(nèi)皮細胞糖萼損傷有不同程度的減輕。三者對膿毒癥小鼠大腦海馬區(qū)的保護效果優(yōu)劣排序大致為：ROH ≈ SLXHP。免疫組化結果表明,膿毒癥小鼠大腦皮層和海馬區(qū)HPA, MMP-9的表達與對照組相比表達明顯增多,而HP、SLX、ROH對兩種酶蛋白在大腦組織中的表達有抑制作用。綜上所述,本研究可以得出如下結論：HP、SLX、ROH可以在膿毒癥時發(fā)揮糖萼保護作用,降低膿毒癥的死亡率。本課題的創(chuàng)新之處在于采用透射電鏡方法考察了膿毒癥小鼠心臟、小腸和大腦的內(nèi)皮糖萼微觀結構,透射電鏡觀察標本固定時未對小鼠做主動脈灌注,避免了糖萼在灌注過程中的脫落。本課題工作有待在以下幾個方面深入：膿毒癥小鼠的血清HPA含量與正常組相比驟然下降,這一反常結果經(jīng)過多次重復實驗都是如此,對此需要進一步研究以闡明其原因。ROH在膿毒癥小鼠28天生存率中表現(xiàn)出色,尤其是在造模后第二天生存率高達70%。但在后續(xù)對心臟、小腸和大腦保護作用的研究中,雖然ROH對內(nèi)皮糖萼保護作用明顯,卻并沒有始終保持最佳表現(xiàn),這說明糖萼損傷雖是膿毒癥重要但非唯一的病理機制,ROH能夠顯著提高生存率的原因需要進一步探討。由于大腦損傷對生存率的影響很大,且糖萼對血腦屏障有重要意義,應針對糖胺聚糖改善膿毒癥血腦屏障損傷情況繼續(xù)深入研究。
【關鍵詞】：膿毒癥 糖萼 肝素 乙酰肝素酶 基質(zhì)金屬蛋白酶-9 舒洛地特
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 摘要12-16
• Abstract16-21
• 符號說明21-22
• 第一章 前言22-31
• 1 膿毒癥22-23
• 2 糖萼23-24
• 3 膿毒癥與糖萼24-26
• 4 膿毒癥內(nèi)皮糖萼損傷機制26-28
• 4.1 內(nèi)皮糖萼與乙酰肝素酶26-27
• 4.2 內(nèi)皮糖萼與基質(zhì)金屬蛋白酶.927-28
• 5 糖胺聚糖對膿毒癥的治療概況以及研究進展28-29
• 6 本課題的主要研究思路29-31
• 第二章 糖胺聚糖對小鼠膿毒癥28天生存率的影響31-35
• 1 材料31-32
• 1.1 實驗動物31
• 1.2 試藥31-32
• 2 方法32-33
• 2.1 小鼠膿毒癥生存率實驗32
• 2.2 統(tǒng)計學處理32-33
• 3 結果33
• 4 討論33-35
• 第三章 糖胺聚糖對膿毒癥小鼠血清HPA和MMP-9、HS和Syndecan-1的含量及其時相變化的影響35-46
• 1 材料35-37
• 1.1 實驗動物35
• 1.2 試藥35-36
• 1.3 儀器36-37
• 2 方法37-39
• 2.1 膿毒癥小鼠模型的建立、干預及血樣采集37
• 2.2 血清HPA、MMP-9含量測定37-39
• 2.2.1 準備試劑與血清稀釋37-38
• 2.2.2 檢測程序38
• 2.2.3 膿毒癥小鼠血清HPA、MMP-9含量計算38-39
• 2.3 膿毒癥小鼠血清HS、Syndecan-1含量測定39
• 2.3.1 準備試劑與血清稀釋39
• 2.3.2 檢測程序39
• 2.3.3 膿毒癥小鼠血清HS、Syndecan-1含量計算39
• 2.4 統(tǒng)計學處理39
• 3 結果39-43
• 3.1 膿毒癥小鼠血清HPA、MMP-9含量40-42
• 3.2 膿毒癥小鼠血清HS、Syndecan-1含量42-43
• 4 討論43-46
• 第四章 糖胺聚糖對膿毒癥小鼠心臟損傷的保護作用研究46-55
• 1 材料46-47
• 1.1 實驗動物46
• 1.2 試藥46-47
• 1.3 主要儀器47
• 2 方法47-50
• 2.1 膿毒癥小鼠模型的建立47-48
• 2.2 HE染色方法考察心臟損傷情況48-49
• 2.3 透射電鏡觀察心臟糖萼結構49
• 2.4 免疫組織化學方法考察心臟HPA和MMP-9的表達49-50
• 3 結果50-53
• 3.1 HE染色考察心臟損傷情況50
• 3.2 透射電鏡觀察心臟內(nèi)皮糖萼損傷情況50-52
• 3.3 免疫組織化學方法考察心臟HPA和MMP-9的表達52-53
• 4 討論53-55
• 第五章 糖胺聚糖對膿毒癥小鼠小腸損傷的保護作用研究55-62
• 1 材料55-56
• 1.1 實驗動物55
• 1.2 試藥55-56
• 1.3 主要儀器56
• 2 方法56-57
• 2.1 膿毒癥小鼠模型的建立56-57
• 2.1.1 膿毒癥小鼠模型的建立方法56
• 2.1.2 分組情況同第四章2.1.256
• 2.1.3 小腸標本的采集56-57
• 2.2 HE染色方法57
• 2.3 透射電鏡觀察方法57
• 2.4 免疫組織化學方法考察小腸HPA和MMP-9的表達57
• 3 結果57-61
• 3.1 HE染色考察小腸損傷情況57-58
• 3.2 透射電鏡考察小腸內(nèi)皮糖萼損傷58-60
• 3.3 免疫組織化學方法考察小腸HPA和MMP-9的表達60-61
• 4 討論61-62
• 第六章 糖胺聚糖對膿毒癥小鼠大腦損傷的保護作用研究62-72
• 1 材料62-64
• 1.1 實驗動物62
• 1.2 試藥62-63
• 1.3 主要儀器63-64
• 2 方法64-65
• 2.1 膿毒癥小鼠模型的建立64
• 2.1.1 膿毒癥小鼠模型的建立方法64
• 2.1.2 分組情況64
• 2.1.3 大腦標本的采集64
• 2.2 HE染色方法考察大腦損傷情況64
• 2.3 透射電鏡觀察大腦內(nèi)皮糖萼損傷64-65
• 2.4 免疫組織化學方法考察大腦HPA和MMP-9的表達65
• 3 結果65-70
• 3.1 HE染色考察大腦損傷情況65-66
• 3.2 透射電鏡觀察大腦內(nèi)皮糖萼損傷情況66-68
• 3.3 免疫組織化學方法考察大腦MMP-9和HPA的表達68-70
• 3.3.1 MMP-968-69
• 3.3.2 HPA69-70
• 4 討論70-72
• 總結與展望72-75
• 參考文獻75-81
• 致謝81-82
• 學位論文評閱及答辯情況表82

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1 閻錫新;劉威威;李帥;;膿毒癥發(fā)病機制及集束化治療[J];臨床薈萃;2007年22期

2 常文秀;張金鐘;曹書華;;膿毒癥研究的綜合思路[J];醫(yī)學與哲學(臨床決策論壇版);2007年09期

3 幸澤茂;盧君強;;膿毒癥臨床治療的研究進展[J];廣東醫(yī)學院學報;2008年06期

4 康焰;;膿毒癥的現(xiàn)代診斷與治療[J];中國呼吸與危重監(jiān)護雜志;2009年02期

5 楊樂;鄒曉靜;李樹生;萬磊;姚尚龍;楊光田;;膿毒癥心肌抑制研究進展[J];內(nèi)科急危重癥雜志;2010年01期

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1 任海波;許衛(wèi)江;;膿毒癥休克治療進展[A];第三屆重癥醫(yī)學大會論文匯編[C];2009年

2 鄭江;;天然藥物拮抗膿毒癥的研究進展[A];第七屆全國創(chuàng)傷學術會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學論壇論文匯編[C];2009年

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1 本報記者 徐述湘;膿毒癥診療研究期待突破[N];中國醫(yī)藥報;2007年

2 北京中醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院急診科;基于四個環(huán)節(jié)辨治膿毒癥[N];中國醫(yī)藥報;2009年

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5 周敏;HMGB1-PTEN信號對膿毒癥肺損傷調(diào)節(jié)性T細胞的影響及機制[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

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1 張振飛;乙酰膽堿及M型乙酰膽堿受體在膿毒癥大鼠心肌損傷中的作用研究[D];河北聯(lián)合大學;2014年

2 趙利;HO-1在膿毒癥大鼠肺組織中的表達及意義[D];石河子大學;2015年

3 崔雷;低分子肝素對膿毒癥大鼠肺血管內(nèi)皮細胞功能的影響[D];石河子大學;2015年

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6 朱永蒙;胸腺五肽對膿毒癥大鼠腎損傷保護作用的實驗研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

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9 李丹丹;心肌脂肪酸結合蛋白在膿毒癥臨床預后的預測價值研究[D];新疆醫(yī)科大學;2016年

10 程濤;下腔靜脈內(nèi)徑呼吸變異度在膿毒癥休克致急性腎損傷中的作用[D];新疆醫(yī)科大學;2016年

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