本文關(guān)鍵詞：臨床感染患者耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐藥機制及毒力研究

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【摘要】：目的選取天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院臨床感染患者分離的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(Carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP),測定其對各類抗菌藥物的敏感性、統(tǒng)計感染患者的臨床特點以分析感染CRKP的危險因素;探究CRKP耐藥機制與碳青霉烯類藥物敏感性的關(guān)系并檢測肺炎克雷伯菌高毒力莢膜血清型及毒力基因的分布情況。方法收集天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2014年5月至2015年5月臨床感染患者分離的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌20株。采用全自動細(xì)菌鑒定儀Vitek2 Compact儀器及配套藥敏卡對菌株進(jìn)行鑒定及藥敏試驗,查詢分離菌株所屬患者的臨床資料,對患者年齡、性別、科室、住院天數(shù)、基礎(chǔ)疾病、分離標(biāo)本類型、是否曾經(jīng)入住ICU、是否曾經(jīng)進(jìn)行過侵襲性操作、分離CRKP前后抗生素使用情況及預(yù)后情況進(jìn)行討論;采用改良Hodge試驗、乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)雙紙片試驗、Carba NP試驗、碳青霉烯類抑制法(Carbapenem Inactivation Method,CIM)四種表型試驗初篩碳青霉烯酶;采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)檢測耐藥基因,包括碳青霉烯酶基因(KPC、IMP、VIM、NDM、SIM、OXA-48)、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因(TEM、SHV和CTX-M)、Amp C酶基因(DHA)、膜孔蛋白編碼基因(ompk35、ompk36);采用拉絲試驗、生物被膜形成試驗、血清殺傷試驗用來檢測菌株毒力情況;PCR方法檢測莢膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)及毒力基因(rmp A、aerobactin和fim H-1)。PCR陽性擴增產(chǎn)物基因測序結(jié)果提交Gen Bank在線數(shù)據(jù)庫比對。結(jié)果20株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌對頭孢菌素類、碳青霉烯類等β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥率較高80%以上,對替加環(huán)素、阿米卡星及左氧氟沙星的耐藥率較低在30%以下。感染患者主要來自老年醫(yī)學(xué)病區(qū)的高齡患者及兒科病區(qū)的新生兒患兒,標(biāo)本類型以呼吸道痰標(biāo)本為主,醫(yī)院獲得性感染是感染的主要來源。改良Hodge試驗檢出KPC基因陽性11株(55%),EDTA雙紙片試驗檢出金屬酶陽性13株(65%),CIM試驗陽性16株,Carba NP試驗檢出產(chǎn)A類酶11株,同時產(chǎn)A類酶、B類酶或D類酶9株;PCR結(jié)果表明,檢出碳青霉烯酶KPC和NDM基因,分別為7株(35%)和8株(40%),超廣譜β-內(nèi)酰胺酶以SHV基因檢出率最高,為16株(80%),Amp C酶DHA基因檢出2株(10%),膜孔蛋白編碼基因ompk35和ompk36分別缺失8株(40%)和13株(65%)。耐藥基因組合分為7種方式,以同時產(chǎn)碳青霉烯酶、ESBLs和膜孔蛋白變異為主,占35%(7/20);其次是僅由ESBLs引起的耐藥,占20%(4/20);僅產(chǎn)碳青霉烯酶伴隨膜孔蛋白變異也占據(jù)一定比例,15%(3/20);產(chǎn)ESBLs合并膜孔蛋白變異和碳青霉烯酶合并高產(chǎn)ESBLs各占10%(2/20),其他組合方式10%(2/20)。rmp A基因陽性8株(40%),均為產(chǎn)碳青霉烯酶伴隨膜孔蛋白變異株,5株產(chǎn)KPC,2株產(chǎn)NDM,1株同時產(chǎn)KPC和NDM基因,其中5株還同時攜帶ESBLs基因。Aerobactin基因6株(30%)陽性,與rmp A基因同時陽性5株,4株產(chǎn)KPC基因。fim H-1基因20株(100%)全陽性。檢出高毒力莢膜血清型K1型3株、K57型1株,其中2株K1型同時攜帶rmp A和aerobactin基因,1株K1型和1株K57型菌株僅產(chǎn)rmp A基因,4株均為產(chǎn)KPC基因菌株。結(jié)論本研究臨床感染患者分離耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌對替加環(huán)素、阿米卡星、左氧氟沙星和環(huán)丙沙星耐藥率較低,對頭孢菌素等β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥率較高。高齡患者和新生兒是醫(yī)院獲得性感染CRKP的主要人群,侵襲性操作及環(huán)境消毒不合格是導(dǎo)致菌株院內(nèi)流行傳播的重要原因。臨床感染患者分離的CRKP主要耐藥機制是產(chǎn)碳青霉烯酶KPC和NDM基因,超廣譜β-內(nèi)酰胺酶合并膜孔蛋白缺失也是導(dǎo)致耐藥的重要原因。檢出產(chǎn)KPC基因的高毒力莢膜血清型K1、K57共4株,檢出率較高,應(yīng)引起臨床重視。
【關(guān)鍵詞】：肺炎克雷伯菌 耐藥性 碳青霉烯酶 莢膜 毒力因子
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R440
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的臨床特征及藥敏狀況16-25
• 1.1 材料和方法16-17
• 1.1.1 材料16
• 1.1.2 方法16-17
• 1.2 結(jié)果17-21
• 1.2.1 藥敏試驗結(jié)果17-18
• 1.2.2 分離耐碳青霉烯肺炎克雷伯患者臨床特點18-21
• 1.3 討論21-24
• 1.3.1 藥敏結(jié)果分析21-22
• 1.3.2 碳青霉烯肺炎克雷伯菌臨床特點分析22-24
• 1.4 小結(jié)24-25
• 二、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型測定和耐藥機制研究25-43
• 2.1 材料和方法25-29
• 2.1.1 材料25-26
• 2.1.2 方法26-29
• 2.2 結(jié)果29-39
• 2.2.1 碳青霉烯酶表型試驗結(jié)果29-31
• 2.2.2 耐藥基因、膜孔蛋白檢測結(jié)果31
• 2.2.3 同一患者不同部位分離細(xì)菌耐藥基因分析31-32
• 2.2.4 耐藥基因組合方式32
• 2.2.5 攜帶耐藥基因與碳青霉烯抗生素耐藥性的關(guān)系32
• 2.2.6 碳青霉烯酶表型試驗與碳青霉烯酶基因檢測結(jié)果比較32-35
• 2.2.7 PCR產(chǎn)物測序結(jié)果35-39
• 2.3 討論39-42
• 2.3.1 碳青霉烯酶表型檢測結(jié)果分析39-40
• 2.3.2 耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐藥機制分析40-42
• 2.4 小結(jié)42-43
• 三、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌毒力表型、高毒力莢膜血清型及毒力基因檢測43-55
• 3.1 材料和方法43-47
• 3.1.1 材料43-44
• 3.1.2 方法44-47
• 3.2 結(jié)果47-52
• 3.2.1 毒力表型試驗結(jié)果47
• 3.2.2 高毒力莢膜血清型及毒力基因檢出情況47-48
• 3.2.3 毒力表型試驗與莢膜血清型、毒力基因的關(guān)系比較48
• 3.2.4 莢膜血清型、毒力基因與耐藥基因的關(guān)系48
• 3.2.5 質(zhì)粒接合試驗48-49
• 3.2.6 PCR產(chǎn)物測序結(jié)果49-52
• 3.3 討論52-54
• 3.4 小結(jié)54-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 發(fā)表論文情況說明63-64
• 綜述 高毒力肺炎克雷伯菌毒力研究進(jìn)展64-77
• 綜述參考文獻(xiàn)71-77
• 致謝77-78
• 個人簡歷78

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：845607