發(fā)布時間：2017-09-11 08:21

  本文關鍵詞：TREM-2在腹腔感染膿毒癥的作用研究

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【摘要】：目的:探討腹腔感染性膿毒癥中TREM-2(髓樣細胞觸發(fā)受體)與Janus激酶-信號轉導和轉錄激活因子(JAK/STAT)通路的關系。方法:實驗對象為雄性清潔級Wistar大鼠,體重304±11g。實驗設計分為兩部分:第一部分為腹腔感染性膿毒癥大鼠模型的建立。將80只大鼠隨機分為對照組(n=8)、假手術組(n=32)、模型組(CLP組,n=40),模型組采用盲腸結扎穿孔法[1](Cecal ligation and puncture,CLP)制備腹腔感染性膿毒癥模型;對照組不作處理;假手術組僅麻醉和開關腹腔,不行手術處理。記錄72h死亡情況,采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清、腹引液白細胞介素(IL)-1、IL-4、IL-6、IL-10濃度變化。第二部分為應用JAK2抑制劑AG490和STAT抑制劑雷帕霉素(RPM)干預后,觀察肝組織TREM-2表達情況:分為假手術組(n=24)、CLP組(n=48)、AG490組(n=48)和RPM組(n=48),后2組分別于CLP前0.5h皮下注射AG490 8 mg/kg、RPM 0.4mg/kg,各組于術后6、24、48、72h從內眥靜脈取靜脈血0.3ml后處死動物,留取血清、腹引液及肝組織標本備用。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清、腹引液白細胞介素(IL)-1、IL-4、IL-6、IL-10濃度變化;采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測肝組織TREM-2m RNA的表達。結果:第一部分:對照組和假手術組大鼠隨時間進展生命體征及腹部解剖無明顯改變。CLP組大鼠術后72h腹部探查可見多臟器淤血、粘連,回腸組織明顯腫脹,腹腔滲液增多伴惡臭等炎性改變。建模后72h,血液和腹引液中,CLP組IL-1、IL-6和IL-4、IL-10較對照組和假手術組均明顯增加(P0.01),說明腹腔感染性膿毒癥大鼠模型復制成功。第二部分:(1)與假手術組相比,CLP組血清炎癥因子濃度6h即開始升高,72h達高峰(P0.01)。應用AG490后,血清炎癥因子濃度6h即開始升高,72h達高峰,較CLP組相比無差異;RPM組IL-1、IL-4、IL-10的濃度6h最高,隨時間逐漸降低,且顯著低于相同時間點CLP組,而6h IL-6的濃度雖較CLP組無差異,但24h、48h、72h IL-6的濃度較CLP組顯著降低(P0.01)。(2)與假手術組相比,CLP組腹引液炎癥因子濃度6h即開始升高,72h達高峰(P0.01)。應用AG490后,腹引液炎癥因子濃度6h即開始升高,72h達高峰,較CLP組相比無差異;RPM組,IL-4、IL-10 6h即達到峰值,隨時間推進呈下降趨勢,與相同時間點CLP組相比有明顯統(tǒng)計學差異,而6h IL-1、IL-6的濃度雖較CLP組無差異,但24h、48h、72h IL-1、IL-6的濃度較CLP組顯著降低(P0.01)。(3)RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),CLP組肝組織TREM-2 m RNA的表達隨時間逐漸減低;AG490組肝組織TREM-2 m RNA的表達隨時間延長呈降低趨勢,較同時間點CLP組肝組織TREM-2 m RNA的表達無顯著性差異;RPM組肝組織TREM-2 m RNA的表達雖在6h較CLP組TREM-2 m RNA的表達減少,但在24、48、72h顯著高于同時間點CLP組TREM-2 m RNA的表達(P0.01)。結論:1.本實驗證實腹腔感染性膿毒癥時大鼠肝組織TREM-2表達顯著降低,而血清及腹引液炎癥因子明顯升高,說明TREM-2對炎癥反應的級聯(lián)擴大有限制作用,TREM-2缺乏,導致這種限制作用減弱,炎癥因子大量釋放,加重膿毒癥的進展。2.應用STAT抑制劑RPM后,TREM-2的表達明顯增加,炎癥因子釋放減少,提示JAK/STAT通路可能阻礙了TREM-2的表達,抑制STAT能夠上調TREM-2的表達,從而發(fā)揮其在調節(jié)炎癥反應和免疫應答方面的作用,但具體機制有待進一步研究。
【關鍵詞】：膿毒癥 TREM-2 JAK/STAT AG490 RPM CLP
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、腹腔感染性膿毒癥大鼠模型的建立13-20
• 1.1 對象和方法13-16
• 1.1.1 動物模型的制備與分組13
• 1.1.2 實驗試劑及儀器13-14
• 1.1.3 標本收集14
• 1.1.4 觀察指標14
• 1.1.5 檢測方法14-16
• 1.1.6 統(tǒng)計學方法16
• 1.2 結果16-18
• 1.2.1 各組大鼠一般情況觀察16-17
• 1.2.2 對照組、假手術組和CLP組三組血清炎癥因子的比較17-18
• 1.2.3 對照組、假手術組和CLP組三組腹引液炎癥因子的比較18
• 1.3 討論18-19
• 1.4 小結19-20
• 二、TREM-2與JAK/STAT信號通路關系的研究20-39
• 2.1 對象和方法20-30
• 2.1.1 動物模型的制備與分組20
• 2.1.2 實驗試劑及儀器20-22
• 2.1.3 標本收集22-23
• 2.1.4 觀察指標23
• 2.1.5 檢測方法23-30
• 2.1.6 統(tǒng)計學方法30
• 2.2 結果30-34
• 2.2.1 各組大鼠血清炎癥因子的變化30-31
• 2.2.2 各組大鼠腹引液炎癥因子的變化31-32
• 2.2.3 Real-time PCR檢測肝組織TREM-2mRNA的表達32-33
• 2.2.4 Western Blot檢測肝組織TREM-2蛋白的表達33-34
• 2.3 討論34-38
• 2.3.1 JAK/STAT信號通路與膿毒癥34-35
• 2.3.2 TREM-2與膿毒癥35-36
• 2.3.3 TREM-2對炎癥因子IL-1、IL-4、IL-6、IL-10的影響36-38
• 2.4 小結38-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-44
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明44-45
• 綜述 JAK/STAT、TREM-2與膿毒癥關系研究進展45-54
• 綜述參考文獻51-54
• 致謝54-55
• 個人簡介55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前4條

1 王合麗;呂大倫;;JAK/STAT通路在膿毒癥中作用研究進展[J];長治醫(yī)學院學報;2012年06期

2 陳駕君;白祥軍;李仁杰;李占飛;;創(chuàng)傷膿毒癥患者外周血Th17/Treg平衡變化及臨床意義[J];中華創(chuàng)傷雜志;2012年10期

3 李淑芬;孫國瑛;周勇;周慧芳;段佳熙;管茶香;;TREM-2對小鼠肺成纖維細胞凋亡的影響[J];國際病理科學與臨床雜志;2011年04期

4 藺靜,姚詠明;TREMs受體的研究新進展[J];國外醫(yī)學(生理、病理科學與臨床分冊);2003年06期

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本文編號：829628