本文關(guān)鍵詞：成都醫(yī)學(xué)院附一院鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氨基糖苷類藥物高水平耐藥的流行病學(xué)研究

  更多相關(guān)文章： 鮑曼不動(dòng)桿菌 氨基糖苷耐藥基因 聚合酶鏈反應(yīng) 整合子 多位點(diǎn)序列分型

【摘要】：目的:了解鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株對(duì)氨基糖苷類藥物的耐藥情況,檢測(cè)5種氨基糖苷修飾酶基因、10種16Sr RNA甲基化酶及整合酶基因在鮑曼不動(dòng)桿菌中的分布,探討其在介導(dǎo)氨基糖苷類抗菌藥物高水平耐藥中的作用,分析本地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥機(jī)制,為臨床有效預(yù)防和控制耐藥菌在院內(nèi)的感染和播散流行提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù),同時(shí)也為尋找介導(dǎo)氨基糖苷類耐藥的新基因或新機(jī)制提供線索。方法:通過(guò)法國(guó)生物-梅里埃ATB細(xì)菌鑒定儀及16Sr RNA、rec A序列分析法,對(duì)臨床分離株進(jìn)行菌種鑒定;對(duì)確證的鮑曼不動(dòng)桿菌采用瓊脂二倍稀釋法檢測(cè)118株臨床分離菌對(duì)氨基糖苷類藥物的最低抑菌濃度(Minmal Inhibitory Concentrations MICs):將阿米卡星或慶大霉素MIC≥256μg/ml的菌株定義為高水平耐藥株,用PCR技術(shù)檢測(cè)5種修飾酶(ant(2'')-Ia、aac(6')-Ib、aph(3')-Ia、aac(3)-Ia、aac(3)-IIa)基因和10種16Sr RNA甲基化酶(arm A、rmt A、rmt B、rmt C、rmt D、rmt E、rmt F、rmt G、rmt H、npm A)基因,并分析甲基化酶和修飾酶在高水平耐藥株檢出情況。同時(shí)對(duì)菌株攜帶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ類整合子及Ⅰ類整合子可變區(qū)基因盒進(jìn)行檢測(cè),將PCR產(chǎn)物電泳觀察其大致大小,并隨機(jī)選取2個(gè)Ⅰ類整合子基因和若干個(gè)Ⅰ類整合子可變區(qū)陽(yáng)性的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析。統(tǒng)計(jì)Ⅰ類整合子陽(yáng)性率并統(tǒng)計(jì)學(xué)分析Ⅰ類整合子陽(yáng)性株和陰性株對(duì)氨基糖苷類藥物的耐藥性差異。應(yīng)用多位點(diǎn)序列分型(MLST)技術(shù),通過(guò)雙向測(cè)序技術(shù)獲得glt A、gyr B、gdh B、gpi、rec A、rpo D、cpn60 7個(gè)管家基因的序列,拼接核對(duì)后用e BURST軟件確立序列型(STs),進(jìn)而對(duì)75株氨基糖苷類抗生素高水平耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌分型,分析其發(fā)育進(jìn)化關(guān)系。結(jié)果:1、118株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)阿米卡星、慶大霉素、鏈霉素的耐藥率較高,分別為61.08%、61.02%、83.9%,其中有75株對(duì)阿米卡星或慶大霉素高水平耐藥;2、氨基糖苷修飾酶基因ant(2'')-Ia、aac(6')-Ib、aph(3')-Ia、aac(3)-Ia、aac(3)-IIa的檢出率依次是66.95%、69.49%、42.37%、39.83%、14.41%。45.76%的菌株(54/118)檢測(cè)到arm A,均同時(shí)對(duì)阿米卡星和慶大霉素高水平耐藥(MIC≥256μg/ml)。其他9種16Sr RNA甲基化酶基因未檢測(cè)到。arm A、ant(2'')-Ia、aac(6')-Ib基因陽(yáng)性株對(duì)氨基糖苷類藥物的耐藥率明顯高于陰性株,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001);3、118株中有116株擴(kuò)增出Ⅰ類整合子,陽(yáng)性率為72.88%,Ⅰ類整合子的可變區(qū)檢測(cè)到兩類基因盒,分別為dfr A17+aad A5和aac A4+cat B8+aad A1;4、MLST結(jié)果分析顯示75株高水平耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌經(jīng)過(guò)e BURST分析后共分為31個(gè)STs型,其中21個(gè)STs并歸為一個(gè)克隆復(fù)合體CC92,其他10個(gè)STs被確定為單體。最常見(jiàn)的STs型是ST92,占38.67%(29/75);結(jié)論:1、瓊脂稀釋法能準(zhǔn)確的篩選耐氨基糖苷類鮑曼不動(dòng)桿菌;2、本地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株對(duì)氨基糖苷類抗生素耐藥率高;3、本研究顯示氨基糖苷類修飾酶基因aac(6')-Ib、ant(2'')-Ia和16Sr RNA甲基化酶arm A基因在氨基糖苷類抗生素高水平耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中有極高的攜帶率,是整個(gè)地區(qū)該菌對(duì)氨基糖苷類抗生素產(chǎn)生耐藥性的主要原因;4、整合子檢測(cè)結(jié)果表明第Ⅰ類整合子在臨床菌株中分布廣泛,有較高的檢出率,但I(xiàn)類整合子陽(yáng)性和陰性菌株氨基糖苷類抗生素耐藥性的比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,推測(cè)整合子可能不是導(dǎo)致本院鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氨基糖苷類抗生素高水平耐藥的主要原因;5、多位點(diǎn)序列分型表明75株高水平耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌由當(dāng)前中國(guó)最流行的克隆復(fù)合體CC92進(jìn)化而來(lái)。
【關(guān)鍵詞】：鮑曼不動(dòng)桿菌 氨基糖苷耐藥基因 聚合酶鏈反應(yīng) 整合子 多位點(diǎn)序列分型
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R446.5
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 第一部分 臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氨基糖苷類藥物的耐藥性分析14-20
• 1 引言14
• 2 材料和方法14-18
• 2.1 材料14-15
• 2.2 方法15-18
• 3 結(jié)果18-19
• 3.1 多重PCR鑒定結(jié)果18-19
• 3.2 藥敏結(jié)果19
• 4 討論19
• 5 小結(jié)19-20
• 第二部分 鮑曼不動(dòng)桿菌耐氨基糖苷類藥物耐藥基因檢測(cè)20-37
• 1 引言20
• 2. 材料和方法20-24
• 2.1 材料20-22
• 2.2 方法22-24
• 3 結(jié)果24-33
• 3.1 氨基糖苷類修飾酶基因檢測(cè)結(jié)果24-29
• 3.2 氨基糖苷類 16Sr RNA甲基化酶基因檢測(cè)結(jié)果29-30
• 3.3 75 株氨基糖苷類藥物高水平耐藥株中修飾酶和 16Sr RNA甲基化酶基因的分布30-33
• 4 討論33-36
• 5 小結(jié)36-37
• 第三部分 鮑曼不動(dòng)桿菌整合子分布與氨基糖苷類抗生素耐藥相關(guān)研究37-47
• 1 引言37-38
• 2 材料和方法38-40
• 2.1 材料38-39
• 2.2 方法39-40
• 3 結(jié)果40-44
• 4 討論44-46
• 5 小結(jié)46-47
• 第四部分 氨基糖苷類藥物高水平耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型研究47-57
• 1 引言47-48
• 2 材料和方法48-51
• 2.1 材料48
• 2.2 方法48-51
• 3 結(jié)果51-54
• 3.1 氨基糖苷類藥物高水平耐藥株MLST分型結(jié)果51-52
• 3.2 eBURST分析結(jié)果52-54
• 4 討論54-55
• 5 小結(jié)55-57
• 結(jié)論57-58
• 文獻(xiàn)綜述58-63
• 參考文獻(xiàn)63-69
• 附錄69-70
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果70-71
• 致謝71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 Ming-Feng Lin;Chung-Yu Lan;;Antimicrobial resistance in Acinetobacter baumannii : From bench to bedside[J];World Journal of Clinical Cases;2014年12期

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 蔡淑靜;鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥性與Ⅰ類整合子關(guān)系研究[D];吉林大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：777131