本文關(guān)鍵詞：LXRs活化轉(zhuǎn)錄后調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子mRNA降解及其機(jī)制

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【摘要】：肝X受體(Liver X Receptors,LXRs)具有廣譜抗炎特性,然而LXRs是否在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控炎性細(xì)胞因子表達(dá)尚未闡明。mRNA降解調(diào)控是轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因表達(dá)的重要方式之一,AREs(AU-rich elements)介導(dǎo)的mRNA降解是炎性細(xì)胞因子m RNA代謝的一個(gè)共有方式。Tristetraprolin(TTP)作為一種典型的ARE結(jié)合蛋白,參與調(diào)控多種細(xì)胞因子mRNA降解。為闡明LXRs是否通過調(diào)控炎性細(xì)胞因子mRNA降解發(fā)揮抗炎特性,本研究通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探討LXRs在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)的作用及機(jī)制。方法:佛波酯誘導(dǎo)THP-1單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞,LXRs激動(dòng)劑T0901317(10μM)預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞6h后,予以脂多糖(10ng/mL)刺激6h,利用ELISA、PCR、Western Blot等技術(shù)檢測TNF-α、IL-6、IL-1β和TTP mRNA及蛋白表達(dá)水平。不同因素處理組的THP-1巨噬細(xì)胞加入5ug/mL放線菌素D(Actinomycin D,Act D)終止轉(zhuǎn)錄,阻斷轉(zhuǎn)錄后的不同時(shí)間點(diǎn)提取RNA,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)不同時(shí)間段TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表達(dá)水平,以阻斷轉(zhuǎn)錄初始mRNA為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算mRNA殘留比例。通過小分子siRNA技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染18h后,Western blot、ELISA檢測TTP siRNA沉默TTP表達(dá)效果和炎性細(xì)胞因子表達(dá)影響,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測不同處理因素組炎性細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:T0901317預(yù)處理顯著抑制脂多糖誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA及蛋白表達(dá),且T0901317預(yù)處理顯著上調(diào)LPS誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞TTP表達(dá)。放線菌素D阻斷轉(zhuǎn)錄后60,90,120min時(shí)間點(diǎn),T0901317預(yù)處理的THP-1巨噬細(xì)胞顯著抑制LPS誘導(dǎo)的TNF-α,IL-6,IL-1βm RNA表達(dá)水平,殘留比例顯著低于單純LPS處理組,說明T0901317預(yù)處理促使LPS誘導(dǎo)的TNF-α,IL-6,IL-1βmRNA降解。TTP siRNA轉(zhuǎn)染的THP-1巨噬細(xì)胞顯著下調(diào)TTP的表達(dá),并明顯抑制T0901317下調(diào)炎性細(xì)胞因子表達(dá)和促進(jìn)炎性細(xì)胞因子mRNA降解的作用。結(jié)論:1.LXRs活化轉(zhuǎn)錄后調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子mRNA降解。2.LXRs通過TTP促使LPS誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子mRNA降解。本研究明確了LXRs轉(zhuǎn)錄后調(diào)控炎癥反應(yīng)的新型分子機(jī)制,為多靶點(diǎn)廣譜抗炎治療全身炎癥反應(yīng)綜合征等急慢性炎癥性疾病開拓新思路,為抗炎藥物開發(fā)提供新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：肝X受體 mRNA降解 Tristetraprolin 炎性細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R459.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略詞表9-13
• 第一部分 LXRs活化對(duì)LPS誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子mRNA降解的影響13-33
• 1.前言13-15
• 2.實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 3.實(shí)驗(yàn)方法17-23
• 4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-27
• 5 討論27-31
• 6 小結(jié)31-33
• 第二部分 LXRs活化促使炎性細(xì)胞因子mRNA降解的相關(guān)分子機(jī)制33-47
• 1.前言33-35
• 2.實(shí)驗(yàn)材料35
• 3.實(shí)驗(yàn)方法35-37
• 4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-43
• 5討論43-47
• 結(jié)論47-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 介導(dǎo)mRNA降解的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控炎癥反應(yīng)機(jī)制及進(jìn)展 綜述53-61
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果61-63
• 課題資助63-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李濤;向蕾;涂劍;;肝X受體——膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)與炎癥的共同平臺(tái)[J];中國動(dòng)脈硬化雜志;2014年04期

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本文編號(hào)：764624