發(fā)布時(shí)間：2017-08-14 01:10

  本文關(guān)鍵詞：甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌臨床分離株的分子分型及耐藥性分析

  更多相關(guān)文章： 甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌 流行病學(xué) 分子分型 多重耐藥 藥敏試驗(yàn)

【摘要】：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),簡(jiǎn)稱金葡菌,不僅是醫(yī)院內(nèi)獲得性感染的重要病原菌,而且在社區(qū)獲得性感染中,金葡菌也是引起皮膚、軟組織等感染的主要原因。金葡菌的致病作用多樣,可引起多種感染性疾病,從輕度的皮膚、軟組織感染到危及生命的敗血癥、心內(nèi)膜炎、肺炎等,嚴(yán)重危害人類健康。金葡菌除可以表達(dá)多種毒力因子致病外,更為人們所忌憚的是其對(duì)抗生素耐藥的快速形成能力。近年來(lái),隨著抗生素的廣泛應(yīng)用,特別是廣譜抗生素的使用,金葡菌的耐藥形勢(shì)日益嚴(yán)峻,耐3種以上抗生素的多重耐藥菌檢出比例越來(lái)越高。以往的研究大多關(guān)注于耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant S.aureus,MRSA),然而仍然有相當(dāng)部分的感染是由甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(methicillinsusceptible S.aureus,MSSA)引起,在我國(guó)MSSA感染約占金葡菌感染的40%,但是對(duì)于MSSA的分子特征還缺乏了解。在分子型別上,與MRSA相比,MSSA表現(xiàn)出更高的遺傳多樣性。在特定地區(qū),MSSA的流行無(wú)明顯的優(yōu)勢(shì)克隆,常常多種分子型別的菌株并存,我國(guó)不同的研究中報(bào)道的主要MSSA型別也存在差異。研究發(fā)現(xiàn),MSSA攜帶的多種毒力因子,如腸毒素、殺白細(xì)胞素等的表達(dá)水平比MRSA高。此外,MSSA菌獲得SCCmec耐藥盒后即轉(zhuǎn)化為MRSA,是MRSA的重要來(lái)源。一般認(rèn)為,MSSA對(duì)除青霉素外的大多數(shù)抗生素敏感,然而近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)MSSA的耐藥水平逐年升高,多重耐藥菌株檢出率持續(xù)上升。分析MSSA臨床菌株的分子特征和耐藥表型對(duì)于鑒定菌株間親緣關(guān)系、有效控制MSSA的感染和傳播具有重要現(xiàn)實(shí)意義。在我國(guó),MSSA感染仍然占金葡菌感染的40%左右,然而,現(xiàn)有的研究報(bào)道常與對(duì)MRSA的分析同時(shí)進(jìn)行,以MRSA為主,尚未見(jiàn)專門(mén)針對(duì)MSSA的研究報(bào)道,對(duì)MSSA的分子特征所知有限。本研究對(duì)2012年6月至2013年12月期間收集于重慶和烏魯木齊兩座城市的115株MSSA臨床菌株進(jìn)行了研究,綜合運(yùn)用多種分子分型方法,分析菌株的分子特征,在此基礎(chǔ)上對(duì)菌株的抗生素耐藥譜進(jìn)行檢測(cè),探討菌株分子特征與耐藥表型之間的關(guān)系。所得結(jié)果不僅可以在一定程度上揭示我國(guó)MSSA的流行現(xiàn)狀,探討其分子特征與耐藥表型的關(guān)系,也可以豐富我國(guó)金葡菌的分子流行病學(xué)資料,為進(jìn)一步研究金葡菌耐藥機(jī)制,指導(dǎo)臨床抗生素合理應(yīng)用,防控金葡菌感染提供重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容和研究結(jié)果如下:1.MSSA的分子分型研究(1)葡萄球菌A蛋白基因多態(tài)性分析(spa分型):用PCR方法擴(kuò)增spa基因的X區(qū),測(cè)序后獲得連續(xù)的24bp重復(fù)序列,從數(shù)據(jù)庫(kù)(http://spaserver.ridom.de/)中得到每個(gè)24bp重復(fù)序列相對(duì)應(yīng)的編號(hào),再根據(jù)編號(hào)和排列順序確定菌株的spa型別。結(jié)果115株MSSA菌株共獲得45個(gè)spa型別,主要型別有t11413(8.7%,10株)、t571(6.1%,7株)和t7164(6.1%,7/115),這三種型別占所有菌株的20.9%,另有11株可能為新的spa型別。(2)多位點(diǎn)序列分析(MLST分型):根據(jù)金葡菌7個(gè)管家基因(arc,aro E,glp F,gmk,pta,tpi,yqi L)的多態(tài)性確定其型別。首先分別PCR擴(kuò)增每株菌的7個(gè)管家基因,測(cè)序后提交數(shù)據(jù)庫(kù)(http://saureus.mlst.net/)獲得每個(gè)管家基因的序號(hào),然后按順序依次排列,獲得其ST型別,與已知的金葡菌流行株進(jìn)行比較。115株MSSA菌可分為26個(gè)ST型,其中主要型別有ST121(11.3%,13株)、ST15(11.3%,13株)、ST7(10.4%,12株)、ST22(10.4%,12株)、ST398(7.0%,8株)、ST188(6.1%%,7株)以及ST88(5.2%,6株),占所有MSSA菌株的61.7%。(3)金葡菌附屬基因調(diào)節(jié)子(agr)分型:金葡菌agr位點(diǎn)的可變區(qū)包含編碼Agr D的基因序列、編碼Agr B的C末端2/3的序列和編碼Agr C的N末端的部分序列。不同金葡菌菌株的agr位點(diǎn)可變區(qū)呈現(xiàn)出多態(tài)性,利用這一點(diǎn)可將金葡菌分為4種不同的agr型別。115株MSSA菌株共檢出agr I型71株(61.7%)、agr II型17株(14.8%)、agr III型13株(11.3%)、agr IV型14株(12.2%)。(4)脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分型:先將金葡菌包埋于瓊脂中,然后用適當(dāng)?shù)膬?nèi)切酶在原位對(duì)細(xì)菌的整個(gè)染色體進(jìn)行酶切,電泳時(shí)通過(guò)不斷交替變換電場(chǎng)方向和脈沖時(shí)間,使酶切片段在電泳系統(tǒng)中得到較好的分離,最后電泳結(jié)果進(jìn)行聚類分析。結(jié)果107株MSSA分離株可分為10個(gè)聚類組,依次命名為A-J,其中A型(26.2%,28/107)、B型(26.2%,28/107)和F型(23.4%,25/107)為優(yōu)勢(shì)型別,占所有MSSA菌株的75.8%(81/107)。8株ST398型菌株無(wú)法分型。(5)殺白細(xì)胞毒素毒力基因(pvl)檢測(cè):115株MSSA中有33株顯示pvl基因陽(yáng)性,陽(yáng)性率為28.7%。2.MSSA的耐藥性分析檢測(cè)了115株MSSA對(duì)13種臨床常用抗生素的耐藥情況,結(jié)果所有菌株對(duì)苯唑西林,利奈唑胺,萬(wàn)古霉素,替考拉寧都敏感;僅有1株對(duì)利福平中介耐藥;對(duì)復(fù)方新諾明(28.7%,33/115)、四環(huán)素(18.3%,21/115)、慶大霉素(7.8%,9/115)、環(huán)丙沙星(5.2%,6/115)、左氧氟沙星(2.6%,3/115)呈不同程度的低水平耐藥;而對(duì)青霉素(83.4%,96/115)、紅霉素(60.0%,69/115)和克林霉素(51.3%,59/115)呈高水平耐藥。通常將對(duì)3類以上(含3類)抗生素耐藥的細(xì)菌定義為多重耐藥菌(multidrug-resistant,MDR)。我們的檢測(cè)表明47.8%(55/115)的MSSA菌株為MDR菌株,其中大多數(shù)(89.1%,49/55)至少對(duì)青霉素、紅霉素和克林霉素3種抗生素耐藥。用PCR方法檢測(cè)所有MSSA菌株這3種抗生素耐藥基因的攜帶情況,結(jié)果青霉素耐藥基因bla Z的攜帶率為91.3%(105/115),紅霉素、克林霉素耐藥基因erm A、erm C攜帶率分別為30.4%(35/115)、92.2%(106/115)。結(jié)合MSSA菌株的分子特征來(lái)看,4株ST943型菌都為MDR菌株;13株ST121型菌中有9株為MDR菌株(69.2%),而且大多數(shù)(88.9%,8/9)有共同的耐藥譜(PEN-ERYCLI);3株ST398型MDR菌株都對(duì)至少4類抗生素耐藥。此外,大多數(shù)(76.0%,19/25)PFGE F型菌株屬于多重耐藥菌,其中包含一株(ST45-t1081)對(duì)7種抗生素耐藥。綜上所述,本研究通過(guò)分子分型分析揭示了我國(guó)重慶及烏魯木齊地區(qū)MSSA的主要種群結(jié)構(gòu),通過(guò)耐藥性分析發(fā)現(xiàn)了較高的MDR檢出率。所分析的MSSA臨床菌株具有高度的遺傳多樣性,優(yōu)勢(shì)流行克隆不明顯,除國(guó)內(nèi)經(jīng)常存在的t571外,t11413和t7164也占據(jù)一定地位。具有高毒力、高耐藥性的ST121克隆在我國(guó)以往的報(bào)道中少見(jiàn),在本研究中具有一定優(yōu)勢(shì),值得高度關(guān)注。上述結(jié)果為了解MSSA的流行病學(xué)特征提供了重要實(shí)驗(yàn)依據(jù),盡管MRSA仍然是金葡菌感染的主要問(wèn)題,但是MSSA因?yàn)槠漭^強(qiáng)的毒力和日益增長(zhǎng)的耐藥性也應(yīng)引起足夠的重視。
【關(guān)鍵詞】：甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌 流行病學(xué) 分子分型 多重耐藥 藥敏試驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R446.5
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 英文摘要6-10
• 中文摘要10-13
• 第一章 前言13-17
• 1.1 選題緣由13
• 1.2 研究背景13-14
• 1.3 研究意義14-15
• 1.4 研究?jī)?nèi)容15
• 1.5 方法15-17
• 第二章 MSSA臨床分離株的分子分型17-43
• 2.1 材料與方法18-30
• 2.2 結(jié)果30-40
• 2.3 討論40-43
• 第三章 MSSA臨床分離株的耐藥性分析43-52
• 3.1 材料與方法43-46
• 3.2 結(jié)果46-50
• 3.3 討論50-52
• 第四章 全文總結(jié)52-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 文獻(xiàn)綜述 金黃色葡萄球菌分子分型研究現(xiàn)狀60-80
• 參考文獻(xiàn)73-80
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果及參與的課題80-81
• 致謝81

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 邢進(jìn);岳秉飛;賀爭(zhēng)鳴;;綠膿桿菌分子分型方法研究進(jìn)展[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2012年08期

2 何秋瑩;陳渡波;曾華;黃彬;張智賢;蔡壬辛;江曉冰;;耐甲氧西林金黃色葡萄球菌分子分型研究進(jìn)展[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2014年05期

3 梁未麗;王洪霞;周海健;李志鋒;許學(xué)斌;李勤;張代濤;陳春霞;于禮;閆梅英;章麗娟;冉陸;闞飆;;沙門(mén)菌監(jiān)測(cè)點(diǎn)湯卜遜沙門(mén)菌分離株的分子分型和耐藥性分析[J];疾病監(jiān)測(cè);2009年06期

4 潘宏升;荀鳳嬌;田素飛;年華;褚云卓;;社區(qū)相關(guān)性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的分子分型研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2012年02期

5 于振行;王德平;;“十一五”國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃“重大疾病的分子分型和個(gè)體化診療”重大項(xiàng)目布局及實(shí)施情況分析[J];中國(guó)生物工程雜志;2012年06期

6 羅蕓;葉菊蓮;程蘇云;許鋒華;陸群英;孟真;;浙江省134株甲型副傷寒沙門(mén)菌的分子分型研究[J];疾病監(jiān)測(cè);2005年11期

7 楊洋;劉秀梅;;單核細(xì)胞增生性李斯特菌分子分型研究進(jìn)展[J];中國(guó)食品衛(wèi)生雜志;2008年02期

8 丁水軍;;脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)及其在病原菌分子分型中的應(yīng)用[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2009年04期

9 宋紅梅;徐保紅;;沙門(mén)菌快速檢測(cè)與分子分型技術(shù)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2010年07期

10 葉蕊;石麗媛;王鵬;宋志忠;;脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)簡(jiǎn)介及其在細(xì)菌分子分型中的應(yīng)用[J];中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志;2013年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 邢進(jìn);岳秉飛;賀爭(zhēng)鳴;;綠膿桿菌分子分型方法研究進(jìn)展[A];第十屆中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)年會(huì)論文集[C];2012年

2 陳經(jīng)雕;鄧小玲;柯碧霞;劉美真;譚海玲;柯昌文;李柏生;;羊種布魯氏菌菌株分子分型研究[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2010年

3 來(lái)茂德;;從形態(tài)學(xué)分類走向分子分型[A];浙江省第二十次腫瘤防治學(xué)術(shù)年會(huì)暨首屆浙江腫瘤學(xué)術(shù)周論文匯編[C];2006年

4 譚蔚泓;;核酸適配體在腫瘤分子分型中的應(yīng)用(英文)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第9分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

5 饒賢才;程航;袁文常;;金黃色葡萄球菌分子分型研究[A];2012年第五屆全國(guó)微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2012年

6 譚蔚泓;;核酸適配體在腫瘤分子分型中的應(yīng)用[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第3分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

7 鞏向麗;侯水平;張穎;陳守義;;廣州市公共場(chǎng)所中央空調(diào)冷卻塔水中嗜肺軍團(tuán)菌三種分子分型方法的應(yīng)用和評(píng)價(jià)[A];2013年全國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

8 陳宗波;郭華;;臨床標(biāo)本中腸道病毒VP1序列的分子分型研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

9 李凡;;人類腸道病毒基因組條形碼可視化技術(shù)及在分子分型中的應(yīng)用[A];2012全國(guó)臨床微生物與感染免疫學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

10 胡亞萍;王林波;;乳腺浸潤(rùn)性微乳頭狀癌病理分子分型特點(diǎn)及預(yù)后分析[A];國(guó)家級(jí)“乳腺癌診治新進(jìn)展”學(xué)習(xí)班暨學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2013年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 記者 鄭靈巧;拉網(wǎng)搜索未見(jiàn)O104∶H4蹤影[N];健康報(bào);2011年

2 廣東省肺癌研究所所長(zhǎng) 吳一龍;肺癌個(gè)體化治療 現(xiàn)實(shí)還是夢(mèng)想[N];健康報(bào);2010年

3 時(shí)仲省;食管癌分子分型和個(gè)體化診療項(xiàng)目獲科技部資助[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 高薈喬;子宮內(nèi)膜癌預(yù)后相關(guān)因素分析及蛋白質(zhì)分子分型研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2016年

2 王穎碩;兒童肺炎支原體感染的監(jiān)測(cè)分析[D];浙江大學(xué);2016年

3 郭丹;兩種重要食源性致病菌O血清型分子分型系統(tǒng)的建立、兩株不同宿主來(lái)源的大腸桿菌比較基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D];南開(kāi)大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉貞艷;2013-2014年山東省A群鏈球菌分子分型與耐藥性研究[D];山東大學(xué);2015年

2 趙燕;腋窩淋巴結(jié)陰性乳腺癌與分子分型的相關(guān)性及其預(yù)后因素探討[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王明龍;維吾爾族女性乳腺癌不同分子分型的臨床特征及預(yù)后分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

4 邱秀娟;新疆1006例維吾爾族與漢族乳腺癌不同分子分型的臨床病理特征及生存分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

5 楊利利;乳腺癌不同分子分型的臨床病理特征及Ki67表達(dá)的意義[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

6 盧中一;牛奶中金黃色葡萄球菌的分子分型和毒力基因分布研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 汪滿金;NQO1基因C609T多態(tài)性、環(huán)境暴露與乳腺癌遺傳易感性及分子分型關(guān)系的研究[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2015年

8 韋常宏;乳腺癌分子亞型及外周血淋巴細(xì)胞亞群與臨床病理特征的相關(guān)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

9 王世健;乳腺癌DCE-MRI影像特征與分子分型的關(guān)聯(lián)性研究[D];杭州電子科技大學(xué);2016年

10 楊延成;甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌臨床分離株的分子分型及耐藥性分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：669946