本文關(guān)鍵詞：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因檢測(cè)的電化學(xué)生物傳感方法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)是全球人類(lèi)細(xì)菌感染的主要病原體。臨床數(shù)據(jù)表明,MRSA感染的快速診斷和早期治療對(duì)控制感染有積極影響。MRSA對(duì)甲氧西林的耐藥機(jī)制主要是由青霉素結(jié)合蛋白(PBP2a)介導(dǎo)的,而這種結(jié)合蛋白的編碼基因是葡萄球菌染色體mec(SCCmec)中的mec A基因,所以通過(guò)檢測(cè)mec A基因中的一段特異性序列就可以快速直接評(píng)估金黃色葡萄球菌對(duì)甲氧西林的耐藥性。本研究分別利用循環(huán)放大技術(shù)和級(jí)聯(lián)識(shí)別策略制備兩種電化學(xué)生物傳感器,從基因水平對(duì)MRSA感染進(jìn)行靈敏特異的檢測(cè),從而促進(jìn)細(xì)菌感染的早期診斷。方法:1.兩種電化學(xué)生物傳感器的制備:基于等溫鏈置換聚合酶反應(yīng)(ISDPR)和底物循環(huán)放大策略構(gòu)建超靈敏的電化學(xué)DNA傳感器;基于級(jí)聯(lián)DNA分支遷移技術(shù)和雙信號(hào)識(shí)別系統(tǒng)構(gòu)建高特異的電化學(xué)DNA傳感器。用電化學(xué)阻抗譜法(EIS)、循環(huán)伏安法(CV)、原子力顯微鏡(AFM)、熒光分光光度法、瓊脂糖凝膠電泳等方法對(duì)傳感器每一步的修飾進(jìn)行表征。2.分析電化學(xué)DNA傳感器的可行性并優(yōu)化其重要實(shí)驗(yàn)條件:如探針的固定順序、比例、時(shí)間、溫度和濃度,聚合酶的濃度和反應(yīng)溫度等。3.傳感器性能考察及樣本檢測(cè):考察兩種傳感器的分析性能,如檢測(cè)線性范圍、最低檢測(cè)限、特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性等。利用簡(jiǎn)單的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制輸出電化學(xué)信號(hào),用方波伏安法(SWV)檢測(cè)電化學(xué)信號(hào)。結(jié)果:1.用不同的方法對(duì)兩種電化學(xué)生物傳感器的制備過(guò)程進(jìn)行表征,不同方法共同驗(yàn)證電極的成功修飾和制備。2.基于ISDPR技術(shù)的電化學(xué)生物傳感器各項(xiàng)性能:可靈敏地檢測(cè)mec A基因;線性范圍為0.075-200 p M;最低檢測(cè)限為63 p M;重復(fù)性和穩(wěn)定性良好。3.基于級(jí)聯(lián)DNA分支遷移技術(shù)的電化學(xué)生物傳感器各項(xiàng)性能:本檢測(cè)方法展現(xiàn)了良好的分析性能;最低檢測(cè)限是85 p M;具有高的單堿基突變識(shí)別能力。結(jié)論:本研究分別采用目標(biāo)物循環(huán)放大策略和自發(fā)性的DNA分支遷移技術(shù)構(gòu)建兩種新穎電化學(xué)生物傳感器來(lái)檢測(cè)MRSA中的mec A基因。在ISDPR的信號(hào)放大作用下,顯著地提高了傳感器靈敏度,展現(xiàn)了良好的分析性能;在自發(fā)性地級(jí)聯(lián)DNA分支遷移策略的雙重識(shí)別作用下,顯著地提高了檢測(cè)特異性,實(shí)現(xiàn)對(duì)單堿基突變的識(shí)別。兩種傳感器均利用簡(jiǎn)單的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制顯著地簡(jiǎn)化了電化學(xué)生物傳感器的制備和檢測(cè)過(guò)程。更重要的是,這兩種電化學(xué)DNA傳感器只需改變其相應(yīng)的DNA序列就可以方便地應(yīng)用于其他核酸鏈的檢測(cè)。因此,這兩種電化學(xué)生物傳感器在生物醫(yī)學(xué)研究、食品安全、早期臨床診斷和環(huán)境監(jiān)測(cè)中都具有很大的應(yīng)用潛力。
【關(guān)鍵詞】：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 鏈置換聚合酶反應(yīng) DNA分支遷移 級(jí)聯(lián)識(shí)別 電化學(xué)生物傳感器
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R446.5
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 第一部分 基于目標(biāo)循環(huán)放大和等溫鏈置換聚合酶反應(yīng)的電化學(xué)生物傳感器16-27
• 1 實(shí)驗(yàn)部分16-18
• 1.1 試劑與儀器16
• 1.1.1 試劑16
• 1.1.2 儀器16
• 1.2 電化學(xué)核酸傳感器的制備16-18
• 1.2.1 金電極的預(yù)處理16-17
• 1.2.2 金電極的修飾17
• 1.2.3 電化學(xué)傳感器對(duì)mec A基因的檢測(cè)17-18
• 2 結(jié)果與分析18-26
• 2.1 生物傳感器的表征18-20
• 2.1.1 電化學(xué)阻抗法表征18-19
• 2.1.2 循環(huán)伏安法表征19
• 2.1.3 原子力顯微鏡表征19-20
• 2.2 電化學(xué)傳感器的可行性分析20-21
• 2.3 檢測(cè)條件的優(yōu)化21-23
• 2.4 電化學(xué)生物傳感器的分析性能23-24
• 2.5 電化學(xué)生物傳感器的特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性24-26
• 3 小結(jié)26-27
• 第二部分 耦合自發(fā)的級(jí)聯(lián)DNA分支遷移技術(shù)和雙信號(hào)傳感策略的高特異性電化學(xué)DNA生物傳感器27-39
• 1 實(shí)驗(yàn)部分27-30
• 1.1 試劑與儀器27
• 1.1.1 試劑27
• 1.1.2 儀器27
• 1.2 電化學(xué)核酸傳感器的制備27-28
• 1.2.1 金電極的預(yù)處理27-28
• 1.2.2 金電極的修飾28
• 1.3 電化學(xué)信號(hào)檢測(cè)28-30
• 1.4 實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)30
• 1.5 瓊脂糖凝膠電泳30
• 2 結(jié)果與分析30-37
• 2.1 生物傳感系統(tǒng)的表征30-32
• 2.2 雙信號(hào)電化學(xué)傳感器的可行性分析32-33
• 2.3 各種條件的優(yōu)化33-35
• 2.4 電化學(xué)DNA傳感器的性能分析35-37
• 2.5 電化學(xué)生物傳感器的特異性37
• 3 小結(jié)37-39
• 全文總結(jié)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 文獻(xiàn)綜述45-56
• 1 前言45-46
• 2 MRSA46
• 3 檢測(cè)方法46-52
• 3.1 傳統(tǒng)檢測(cè)方法47
• 3.2 基于MEMS的方法47-51
• 3.3 商品化的產(chǎn)品51-52
• 4 總結(jié)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 致謝56-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文57

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 汪婷;耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因檢測(cè)的電化學(xué)生物傳感方法研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因檢測(cè)的電化學(xué)生物傳感方法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：497709