發(fā)布時間：2017-06-29 03:10

  本文關(guān)鍵詞：基于層析試紙條和納米顆粒對破傷風(fēng)抗體進行測定的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：破傷風(fēng)是由高致病性的破傷風(fēng)桿菌所釋放的毒素造成的,由于破傷風(fēng)外毒素直接破壞人體的神經(jīng)肌肉組織,故而發(fā)病后癥狀都比較嚴(yán)重,同時死亡率也比較高。因此,快速、準(zhǔn)確地監(jiān)測人體血清中的破傷風(fēng)抗體水平,對于破傷風(fēng)的預(yù)防和治療起著重要的指導(dǎo)作用。免疫層析試紙條技術(shù)應(yīng)用于破傷風(fēng)抗體的檢測,具有簡便快速、樣品需求量少、對實驗設(shè)備要求低、可用于床邊診斷等優(yōu)勢,在臨床分析和醫(yī)學(xué)診斷等領(lǐng)域有很好的發(fā)展前景。本文針對破傷風(fēng)抗體的測定,發(fā)展了兩種檢測方法,一種是基于雙抗原夾心法原理的膠體金試紙條,另一種是基于量子點的熒光試紙條。具體開展的工作如下:1、膠體金免疫層析試紙條用于破傷風(fēng)抗體的檢測。首先,我們使用檸檬酸鈉還原氯金酸的方法,制備了直徑為40 nm的膠體金顆粒,用目測法、紫外吸收法對所制備的納米金進行了評價。然后,將膠體金作為標(biāo)記探針,通過靜電吸附作用標(biāo)記上破傷風(fēng)原抗原(人源)。分別將破傷風(fēng)原抗原和破傷風(fēng)抗體固定在硝酸纖維素膜上作為檢測線和質(zhì)控線,采用雙抗原夾心法原理構(gòu)建了破傷風(fēng)抗體膠體金快速檢測試紙條。本方法對破傷風(fēng)抗體的檢測限為0.01 IU/mL,特異性良好。試紙條在4°C密封保存6個月,檢測效果幾乎不變。對10個血清樣品進行檢測,檢測結(jié)果與酶聯(lián)免疫(ELISA)方法一致。2、Cu:Zn-In-S/ZnS量子點免疫層析試紙條用于破傷風(fēng)抗體的檢測。首先制備了油溶性的Cu:Zn-In-S/ZnS量子點,通過巰基十一酸進行配體交換,得到水溶性的量子點,并對其進行了紅外、紫外、熒光光譜的表征以及光穩(wěn)定性考察。接下來使用純化后的水溶性Cu:Zn-In-S/ZnS量子點通過化學(xué)鍵合反應(yīng)標(biāo)記上羊抗人IgG(Fc),建立了基于量子點的熒光免疫層析試紙條,檢測線和質(zhì)控線分別為破傷風(fēng)原抗原和人IgG,通過抗原抗體免疫反應(yīng)在檢測線上形成抗原-抗體-二抗-量子點的復(fù)合物結(jié)構(gòu),從而實現(xiàn)對破傷風(fēng)抗體的檢測。對該方法進行了靈敏度、特異性、穩(wěn)定性考察,試紙條的檢測限為0.001 IU/mL,比膠體金試紙條的靈敏度提高了10倍。對白喉抗體、百日咳抗體、麻疹抗體、狂犬病毒抗體四種抗體進行交叉反應(yīng),結(jié)果表明該方法具有良好的特異性。對陰性血清樣品進行加標(biāo)檢測,呈現(xiàn)良好的線性響應(yīng)關(guān)系,表明該方法對破傷風(fēng)抗體可以實現(xiàn)定量檢測,在臨床定量檢測方面有很好的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：破傷風(fēng) 免疫層析試紙條 膠體金 Cu:Zn-In-S/ZnS量子點
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R517.3;R446.6
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 緒論11-30
• 1.1 破傷風(fēng)概述11-14
• 1.1.1 破傷風(fēng)的致病機理11-12
• 1.1.2 破傷風(fēng)的危害12
• 1.1.3 破傷風(fēng)的防治12-13
• 1.1.4 破傷風(fēng)抗體水平的檢測13-14
• 1.2 基于納米顆粒的免疫層析試紙條技術(shù)的概述14-17
• 1.2.1 免疫層析試紙條的組成16
• 1.2.2 免疫層析試紙條技術(shù)原理16-17
• 1.3 膠體金免疫層析試紙條技術(shù)及其應(yīng)用17-22
• 1.3.1 膠體金的制備方法17-18
• 1.3.2 膠體金的性質(zhì)18-19
• 1.3.3 膠體金免疫層析試紙條技術(shù)的應(yīng)用19-21
• 1.3.4 膠體金免疫層析試紙條技術(shù)的優(yōu)點21-22
• 1.4 量子點免疫層析試紙條技術(shù)及其應(yīng)用22-27
• 1.4.1 量子點的性質(zhì)22-24
• 1.4.2 量子點的制備方法24-25
• 1.4.3 量子點免疫層析試紙條技術(shù)的應(yīng)用25-27
• 1.5 基于其它納米材料的免疫層析試紙條及其應(yīng)用27-28
• 1.6 本論文的研究內(nèi)容28-30
• 第二章 基于膠體金免疫層析試紙條檢測破傷風(fēng)抗體30-48
• 2.1 引言30-31
• 2.2 實驗儀器與試劑31-32
• 2.3 實驗方法32-37
• 2.3.1 膠體金溶液的制備32
• 2.3.2 膠體金標(biāo)記破傷風(fēng)原抗原32-33
• 2.3.3 膠體金標(biāo)記破傷風(fēng)原抗原最優(yōu)條件的選擇33-35
• 2.3.4 膠體金試紙條可行性探究35
• 2.3.5 檢測線及質(zhì)控線上蛋白濃度的選擇35
• 2.3.6 試紙條的組裝35-36
• 2.3.7 跑樣時間的選擇36
• 2.3.8 破傷風(fēng)抗體檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立36
• 2.3.9 膠體金試紙條的特異性考察36
• 2.3.10 穩(wěn)定性考察36
• 2.3.11 實際樣品檢測36-37
• 2.4 結(jié)果與討論37-46
• 2.4.1 實驗原理37-38
• 2.4.2 膠體金質(zhì)量評價38-39
• 2.4.3 膠體金標(biāo)記破傷風(fēng)原抗原的條件優(yōu)化39-41
• 2.4.4 膠體金試紙條可行性探究41-42
• 2.4.5 檢測線及質(zhì)控線上蛋白濃度的選擇42-43
• 2.4.6 跑樣時間的選擇43
• 2.4.7 試紙條檢測方法的建立43-44
• 2.4.8 試紙條的特異性44-45
• 2.4.9 試紙條的穩(wěn)定性45-46
• 2.4.10 血清樣品檢測46
• 2.5 結(jié)論46-48
• 第三章 基于Cu:Zn-In-S/ZnS量子點免疫層析試紙條檢測破傷風(fēng)抗體48-67
• 3.1 引言48-49
• 3.2 實驗儀器與試劑49-50
• 3.3 實驗方法50-54
• 3.3.1 Cu:Zn-In-S/ZnS量子點的制備50-51
• 3.3.2 Cu:Zn-In-S/ZnS量子點標(biāo)記羊抗人IgG(Fc)51
• 3.3.3 Cu:Zn-In-S/ZnS量子點標(biāo)記羊抗人IgG(Fc)實驗條件的優(yōu)化51-52
• 3.3.4 量子點試紙條對破傷風(fēng)抗體檢測的可行性研究52
• 3.3.5 檢測條件的優(yōu)化52-53
• 3.3.6 量子點試紙條對破傷風(fēng)抗體檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立53
• 3.3.7 量子點試紙條的特異性考察53-54
• 3.3.8 量子點試紙條的穩(wěn)定性考察54
• 3.3.9 實際樣品檢測54
• 3.4 結(jié)果與討論54-65
• 3.4.1 實驗原理54-55
• 3.4.2 量子點的表征55-58
• 3.4.3 Cu:Zn-In-S/ZnS量子點標(biāo)記羊抗人IgG(Fc)58-59
• 3.4.4 量子點試紙條對破傷風(fēng)抗體檢測的可行性研究59-60
• 3.4.5 實驗條件的優(yōu)化60-63
• 3.4.6 量子點試紙條檢測方法的建立63-64
• 3.4.7 量子點試紙條的特異性考察64-65
• 3.4.8 試紙條穩(wěn)定性考察65
• 3.4.9 實際樣品檢測65
• 3.5 結(jié)論65-67
• 第四章 結(jié)論67-69
• 參考文獻(xiàn)69-77
• 致謝77-78
• 個人簡歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果78

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本文編號：496322