發(fā)布時(shí)間：2024-04-23 02:57

　　藥物代謝相關(guān)基因SNPs的簡(jiǎn)單、快速分型對(duì)指導(dǎo)相關(guān)藥物的個(gè)體化使用具有重要意義。本課題設(shè)計(jì)了一種等位基因特異性DNA酶自組裝(Allele specific DNAzyme assembly,ASDA)比色新方法,用于SNPs簡(jiǎn)單、快速分型。該方法可直接使用口腔拭子樣本,免DNA提取和純化進(jìn)行SNPs基因分型檢測(cè)。本文以MTHFR C677T等位基因?yàn)槟０逶O(shè)計(jì)了新的等位基因特異性引物,同時(shí)標(biāo)記含有G4-DNA酶的莖環(huán)結(jié)構(gòu),從而將特異性的PCR擴(kuò)增子轉(zhuǎn)化為多個(gè)G4-DNA酶組裝物。通過(guò)引入額外錯(cuò)配位點(diǎn)并進(jìn)行優(yōu)化以減少非特異性擴(kuò)增�；诘任换蛱禺愋訢NA酶自主裝策略,該方法能從低至200個(gè)細(xì)胞樣本中直接鑒定MTHFR C677T等位基因型,顯示了較高的靈敏度和優(yōu)異的選擇性�？稍�90分鐘內(nèi)直接檢測(cè)出口腔咽拭子樣本的基因型,具有良好的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性和實(shí)用性。本文建立的等位基因特異性DNA酶自組裝比色新方法為臨床實(shí)驗(yàn)室提供了一個(gè)實(shí)用的平臺(tái)用于簡(jiǎn)單、快速SNPs基因分型,并且為發(fā)展中國(guó)家促進(jìn)個(gè)體化用藥的廣泛應(yīng)用提供潛在的檢測(cè)工具。

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1等位基因特異性DNA酶自組裝SNPs分型新方法實(shí)驗(yàn)原理

3結(jié)果和討論3.1方法原理及設(shè)計(jì)策略基于等位基因特異性DNA酶自組裝SNPs分型新方法的實(shí)驗(yàn)原理如圖1所示，DNA釋放、DNA擴(kuò)增、SNPs識(shí)別和信號(hào)輸出都在一個(gè)PCR管中完成�？谇皇米又械纳掀ぜ�(xì)胞基因組DNA在變性階段釋放并直接由KODFXDNA聚合酶擴(kuò)增[1....

圖2瓊脂糖凝膠電泳表征圖：（A）AS引物3’末端倒數(shù)第3個(gè)堿基引入不同錯(cuò)配的特異性驗(yàn)證，（B）50ng基因組DNA，2μL全血，1.4×104白細(xì)胞及口腔細(xì)胞的AS-PCR產(chǎn)物

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文，反之亦然[36]。臨床實(shí)際樣本中含有許多抑制劑，如血紅蛋白、IgG、乳鐵都可顯著降低大多數(shù)DNA聚合酶的活性。因此，對(duì)未經(jīng)樣本直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)必須選擇能夠抵抗這些抑制劑已知型別的MTHFR677等位基因?qū)嶋H樣本驗(yàn)證了KODF性....

圖3G4-AS引物在退火溫度為68°C時(shí)擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖

MTHFR677等位基因型進(jìn)行準(zhǔn)確增子與Hemin結(jié)合催化ABTS2-/，WP反應(yīng)管中野生型（677CC）而MP反應(yīng)管在該處幾乎沒有吸收MP反應(yīng)管中出現(xiàn)明顯的吸收峰（圖管在418nm處都出現(xiàn)明顯的吸收峰的比色方法可以準(zhǔn)確地對(duì)口腔拭子的插圖為相應(yīng)的比色結(jié)果，....

圖4（A）G4-AS引物用于直接擴(kuò)增口腔拭子上皮細(xì)胞的瓊脂糖凝膠電泳圖；基于ASDA的比色分析方法的UV-vis吸收光譜和可視化照片（插圖）：（B）野生型模板；（C）雜合突變型

AS引物用于直接擴(kuò)增口腔拭子上皮細(xì)胞的瓊脂糖凝膠電泳圖；基UV-vis吸收光譜和可視化照片（插圖）：（B）野生型模板；（C）突變型模板；該實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本為口腔拭子，WP反應(yīng)管為（a）和M（b）。（E）MTHFR677三種型別的SangerDNA測(cè)序結(jié)果hegel....

本文編號(hào)：3962512