本文關鍵詞：分子信標用于活細胞內源性mRNA檢測的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察分子信標(molecular beacons,MB)在活細胞內及在體水平對內源性m RNA檢測的可行性。方法:合成增強型綠色熒光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,e GFP)的MB,模擬體內條件,分別從MB的穩(wěn)定性、與目標基因結合的特異性和敏感性進行檢測,并通過在活細胞和斑馬魚胚胎內的應用來觀察其對內外源性m RNA的檢測的可行性。結果:MB在37℃條件下在體外48小時內經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定未見降解,熔解曲線結果顯示熒光強度差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);并且只有在靶序列存在的條件下MB的信號強度顯著增強,MB的信號強度與靶基因濃度呈正相關并能基本穩(wěn)定存在;經(jīng)e GFP和靶向e GFP的MB共轉染的293T細胞能看到熒光表達,靶向e GFP的MB可特異性結合細胞內e GFP的m RNA;在單細胞期斑馬魚胚胎內共注射MB以及目標單鏈后能觀察到熒光表達。結論:結果表明分子信標可用于活細胞內內源性m RNA的檢測。
【作者單位】： 上海長海醫(yī)院心血管內科;上海浦東新區(qū)公利醫(yī)院;中國人民解放軍第一一七醫(yī)院心血管中心;
【關鍵詞】： 分子信標(MB) 內源性 熔解曲線 SLO 斑馬魚
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81470407)
【分類號】：R3416
【正文快照】： Chinese Library Classification(CLC):R-33;Q599 Document code:AArticle ID:1673-6273(2016)17-3227-05前言MB是于1996年由Tyagi和Kramer首次共同發(fā)現(xiàn)的單鏈寡核苷酸探針,一般包括環(huán)狀區(qū)(Loop)、莖干區(qū)(Stem)、熒光基團(fluorophore)和猝滅基團(Quencher)四部分結構[1]。在

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本文編號：390280