目的:宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性健康的常見惡性腫瘤,發(fā)病率居我國女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之首。目前宮頸癌介入化療方案存在部分患者療效不佳、毒副作用大及腫瘤耐藥等問題,本實(shí)驗(yàn)擬通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)探索重組人p53腺病毒聯(lián)合洛鉑誘導(dǎo)宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡和生長抑制的作用及機(jī)制,從而為重組人p53腺病毒聯(lián)合洛鉑方案應(yīng)用于宮頸癌介入化療提供理論依據(jù)和指導(dǎo),以期提高介入化療療效,減小毒副作用。同時,利用18F-FDG PET/MR一體機(jī)對宮頸癌使用重組人p53腺病毒聯(lián)合洛鉑為基礎(chǔ)的介入化療方案的療效進(jìn)行影像學(xué)評估,初步探討PET/MR對其療效評價和預(yù)測的價值。研究方法:1、體外實(shí)驗(yàn):首先進(jìn)行宮頸癌Hela細(xì)胞培養(yǎng)與傳代,實(shí)驗(yàn)分為空白對照組、洛鉑組、重組人p53腺病毒組和洛鉑+重組人p53腺病毒組。倒置相差顯微鏡及Hoechst33342染色分析細(xì)胞凋亡、觀察細(xì)胞形態(tài)。MTT法檢測宮頸癌Hela細(xì)胞的活性。流式細(xì)胞儀結(jié)合AnnexinV-FITC/PI雙染檢測腫瘤細(xì)胞凋亡率。免疫印跡(Western blotting)檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)。2、動物實(shí)驗(yàn):4-8周齡體重20²2...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要 Abstract 英文縮略語 第一部分 ：重組人p53腺病毒聯(lián)合洛鉑誘導(dǎo)宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡的體外實(shí)驗(yàn)研究
1 前言
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    
2.1.1 細(xì)胞株
    
2.1.2 分子生物學(xué)主要試劑
    
2.1.3 用于細(xì)胞培養(yǎng)的試劑
    
2.1.4 免疫印跡(Westernblotting)所用試劑
    
2.1.5 細(xì)胞活性檢測試劑盒
    
2.1.6 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    
2.2.1 宮頸癌Hela細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
    
2.2.2 最佳感染指數(shù)測定
    
2.2.3 測定腺病毒表達(dá)載體沉默效率
    
2.2.4 倒置相差顯微鏡及Hoechst33342染色分析細(xì)胞凋亡、觀察細(xì)胞形態(tài)
    
2.2.5 MTT法檢測宮頸癌Hela細(xì)胞的活性
    
2.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測腫瘤細(xì)胞凋亡率
    
2.2.7 Westernblot檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)
    
2.2.8 統(tǒng)計學(xué)方法
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 p53基因腺病毒聯(lián)合洛鉑誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 重組人p53腺病毒聯(lián)合洛鉑誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞活性抑制
    3.3 p53基因?qū)胩岣吡寺邈K誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞凋亡率
    3.4 p53基因?qū)朐雒袈邈K誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)促凋亡蛋白激酶切割激活
    3.5 p53基因?qū)胝T導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)促凋亡蛋白表達(dá)增加
    3.6 重組人p53腺病毒導(dǎo)入增強(qiáng)了洛鉑誘導(dǎo)的Mcl-1蛋白切割和細(xì)胞凋亡
4 討論
5 結(jié)論 第二部分 ：重組人重組人p53腺病毒聯(lián)合洛鉑對宮頸癌裸鼠皮下移植瘤生長抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究
1 前言
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    
2.1.1 細(xì)胞株和實(shí)驗(yàn)動物
    
2.1.2 主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    
2.2.1 人宮頸癌Hela細(xì)胞的培養(yǎng)
    
2.2.2 實(shí)驗(yàn)動物的飼養(yǎng)
    
2.2.3 宮頸癌Hela細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立
    
2.2.4 注射重組人p53腺病毒和/或洛鉑后測量體積、瘤重
    
2.2.5 Westernblot檢測p53等蛋白的表達(dá)
    
2.2.6 統(tǒng)計學(xué)方法
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 重組人p53腺病毒和/或洛鉑對宮頸癌裸鼠移植瘤生長的影響
    3.2 平均腫瘤重量以及凋亡事件檢測
4 討論
5 結(jié)論 第三部分 ：重組人p53腺病毒聯(lián)合宮頸癌介入化療的近期療效及PET/MR評價
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
    
2.1.1 臨床病例資料
    
2.1.2 入組標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)
    
2.1.3 臨床表現(xiàn)及輔助檢查
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    
2.2.1 介入化療術(shù)方法及評價指標(biāo)
    
2.2.2 PET/MR圖像采集
    
2.2.3 PET/MR圖像分析
    
2.2.4 療效評價
    
2.2.5 數(shù)據(jù)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 入組患者基本臨床特征、療效及毒副反應(yīng)
    3.2 首次宮頸癌介入化療前后PET/MR參數(shù)變化及不同評價方式療效對比
    3.3 PET參數(shù)(SUL)與DW-MRI參數(shù)(mADC)之間相關(guān)性分析
    3.4 TD與SUL和mADC的之間相關(guān)性分析
    3.5 不同臨床療效亞組的mADC、SUL、TD差異對比
4 討論
5 結(jié)論 本研究創(chuàng)新性的自我評價 參考文獻(xiàn) 綜述
參考文獻(xiàn) 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果 致謝 個人簡歷



本文編號：3750132