登革熱在全球范圍分布廣泛,是傳播最快的蟲(chóng)媒病之一,對(duì)公共醫(yī)療衛(wèi)生造成了極大的負(fù)擔(dān)。而超過(guò)半數(shù)的登革熱患者表現(xiàn)為普通發(fā)熱的癥狀或者無(wú)癥狀,所以?xún)H僅通過(guò)臨床癥狀上來(lái)判斷是否被登革病毒（Dengue Virus,DENV）感染有很大難度,因此建立一種靈敏度高、特異性強(qiáng)的DENV檢測(cè)方法就變得很重要。環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）恒溫反應(yīng)、反應(yīng)時(shí)間短、靈敏度高、特異性強(qiáng),被廣泛用于檢測(cè)各種流行性疾病。然而,引物（特別是3’端）與模板之間的錯(cuò)配將顯著削弱LAMP的效率,限制其對(duì)于基因多樣性的病原微生物的應(yīng)用。本研究針對(duì)這一問(wèn)題,對(duì)傳統(tǒng)LAMP體系進(jìn)行優(yōu)化,首次將具有3’-5’的外切酶活性的高保真酶應(yīng)用于DENV的RT-LAMP檢測(cè)中。當(dāng)LAMP引物的3’端出現(xiàn)各種錯(cuò)配時(shí),錯(cuò)配堿基都會(huì)因?yàn)楦弑Ｕ婷傅?’-5’的外切酶活性而被切除,該方法展現(xiàn)出了對(duì)錯(cuò)配極佳的抗性。在每25μl的LAMP體系中,本研究通過(guò)優(yōu)化,高保真酶的量為0.15 U時(shí)效果最佳。當(dāng)檢測(cè)30000拷貝/反應(yīng)的DENV-4野生型與突變型模板時(shí),改良過(guò)的新型抗突變RT-LAMP的檢測(cè)閾值比傳統(tǒng)RT-LAMP快了5.6-22.6 min,新型... 

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 研究綜述
    1 蟲(chóng)媒病毒的傳播
    2 登革熱概述
    3 DENV檢測(cè)現(xiàn)狀
    4 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
    5 本研究擬解決的問(wèn)題及研究目標(biāo)
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    1 新型抗突變LAMP方法的原理
    2 新型DENV抗突變RT-LAMP的原理驗(yàn)證
    3 抗突變RT-LAMP優(yōu)化結(jié)果
    4 DENV1-4型毒株檢測(cè)結(jié)果
    5 DENV新型RT-LAMP的特異性
    6 DENV新型RT-LAMP的靈敏度與檢測(cè)限
    7 可視化檢測(cè)
    8 使用臨床樣本評(píng)估抗突變RT-LAMP對(duì)DENV的檢測(cè)效果
第四章 討論
    1 抗突變RT-LAMP原理
    2 抗突變RT-LAMP檢測(cè)DENV1-4型毒株
    3 DENV抗突變RT-LAMP方法的特異性與靈敏度
    4 抗突變RT-LAMP的可視化檢測(cè)
    5 抗突變RT-LAMP檢測(cè)臨床樣本
第五章 研究總結(jié)
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表論文及參與課題
致謝



本文編號(hào)：3724605