隨著全球人口老齡化程度日益加深,人類壽命延長的同時(shí)也面臨著慢性疾病對(duì)健康的致命威脅,針對(duì)高血脂、高血壓、糖尿病等大規(guī)模疾病患者人群的早期監(jiān)測(cè),結(jié)合藥物干預(yù)和隨訪,實(shí)施對(duì)生命全周期的健康管理備受關(guān)注。慢性疾病患者人群眾多,但個(gè)體之間存在明顯差異,不同患者的疾病表現(xiàn)以及對(duì)治療藥物的響應(yīng)性往往大相徑庭,這一方面源于個(gè)體間不同的發(fā)病機(jī)制,另一方面源于生活環(huán)境和遺傳背景的不同。幾年來,與精準(zhǔn)醫(yī)療相關(guān)的基因檢測(cè)在疾病早期篩查和干預(yù)中得到重視,構(gòu)建普適、準(zhǔn)確、快速、便捷的基因篩查適宜技術(shù)平臺(tái),在大規(guī)模慢病人群中實(shí)現(xiàn)基因篩查,對(duì)患者危險(xiǎn)分層和精準(zhǔn)治療尤為迫切。常用的基因檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)包括DNA測(cè)序、DNA芯片雜交、質(zhì)譜技術(shù)以及熒光定量PCR等,這些方法因其準(zhǔn)確性高、通量大而備受青睞,但仍受限于昂貴的設(shè)備投入、復(fù)雜的操作和專業(yè)人員的培訓(xùn),此外,靶基因擴(kuò)增保證正確的前提是對(duì)模板純度和濃度范圍高的要求,很難基于上述技術(shù)平臺(tái)實(shí)現(xiàn)免DNA提取對(duì)靶片段的直接擴(kuò)增,不同臨床樣本,如何實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的裂解處理并直接用于PCR擴(kuò)增是影響基因檢測(cè)實(shí)現(xiàn)快速篩查的主要技術(shù)瓶頸。常見的臨床樣本中往往含有PCR抑制因子,常用的基因檢測(cè)技... 

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 常見SNP檢測(cè)技術(shù)概述
        1.1.1 PCR-RFLP技術(shù)
        1.1.2 AS-PCR技術(shù)
        1.1.3 PCR-SSCP技術(shù)
        1.1.4 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
        1.1.5 熒光定量PCR技術(shù)
        1.1.6 基因芯片技術(shù)
        1.1.7 DNA測(cè)序技術(shù)
    1.2 直擴(kuò)PCR技術(shù)概述
        1.2.1 直擴(kuò)PCR技術(shù)
        1.2.2 已有直擴(kuò)PCR技術(shù)
        1.2.3 直擴(kuò)PCR技術(shù)瓶頸
        1.2.4 直擴(kuò)PCR技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)
    1.3 金磁微粒層析法概述
        1.3.1 金磁微粒簡(jiǎn)介
        1.3.2 金磁微粒的應(yīng)用
        1.3.3 金磁微粒層析法
    1.4 乙醛脫氫酶2概述
        1.4.1乙醛脫氫酶2
        1.4.2 乙醛脫氫酶2基因多態(tài)性
        1.4.3 乙醛脫氫酶2與疾病的關(guān)系
    1.5 立題意義及主要內(nèi)容
        1.5.1 目的及意義
        1.5.2 主要內(nèi)容
        1.5.3 研究的創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 直擴(kuò)PCR-金磁微粒層析法基因分型平臺(tái)構(gòu)建
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        2.2.1 主要材料和試劑
        2.2.2 主要儀器和設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 陽性質(zhì)控體系的構(gòu)建
        2.3.2 引物設(shè)計(jì)及篩選
        2.3.3 金磁微粒的制備與試紙條組裝
        2.3.4 樣本處理液篩選與優(yōu)化
        2.3.5 直擴(kuò)PCR體系建立及優(yōu)化
        2.3.6 檢測(cè)結(jié)果判讀方法
        2.3.7 防污染系統(tǒng)驗(yàn)證
        2.3.8 直擴(kuò)系統(tǒng)驗(yàn)證
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 構(gòu)架了ALDH2基因突變檢測(cè)陽性質(zhì)控體系
        2.4.2 設(shè)計(jì)并篩選出最適引物組
        2.4.3 篩選并優(yōu)化了樣本處理液
        2.4.4 建立及優(yōu)化了直擴(kuò)PCR反應(yīng)體系
        2.4.5 證實(shí)UNG防污染系統(tǒng)有效
        2.4.6 驗(yàn)證直擴(kuò)系統(tǒng)有效性
    2.5 本章小結(jié)
第三章 直擴(kuò)PCR-金磁微粒層析法的性能評(píng)估
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        3.2.1 主要材料和試劑
        3.2.2 主要儀器和設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 抗干擾性能評(píng)價(jià)
        3.3.2 穩(wěn)定性評(píng)價(jià)
        3.3.3 特異性評(píng)價(jià)
        3.3.4 靈敏度評(píng)價(jià)
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 具有較強(qiáng)抗干擾能力
        3.4.2 具有較高的穩(wěn)定性
        3.4.3 具有較強(qiáng)的特異性
        3.4.4 具有較好的靈敏度
    3.5 本章小結(jié)
第四章 直擴(kuò)PCR-金磁微粒層析法臨床應(yīng)用研究
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        4.2.1 主要材料和試劑
        4.2.2 主要儀器和設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 臨床樣本的收集
        4.3.2 臨床樣本的處理
        4.3.3 臨床樣本ALDH2 Glu504Lys基因檢測(cè)
        4.3.4 統(tǒng)計(jì)與分析方法
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 臨床樣本檢測(cè)結(jié)果
        4.4.2 ALDH2基因型與藥物作用相關(guān)性分析
    4.5 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間取得的科研成果
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3654760