脫氧核糖核酸酶Ⅰ（Deoxyribonuclease Ⅰ,簡稱DNase Ⅰ）是生物體結構和生命活動的重要組成部分,其研究在醫(yī)學上疾病的臨床診斷、藥物研發(fā)等方面有著廣泛的應用前景。通過分析DNase Ⅰ活性及對其抑制劑的研究,獲取重要的生物信息,可以有效發(fā)揮酶在各個領域的應用價值和意義。此外,癌細胞和細菌作為當今對人類生命和財產安全造成嚴重危害和損失的因素之一,對其進行研究來降低危害程度的新形勢越來越刻不容緩。目前,用于檢測DNasel、細胞和細菌的分析方法多樣且各具特點,熒光分析方法作為其中之一,因其具有檢測方法簡單、背景干擾小、靈敏度高等優(yōu)點,已成為一種極有發(fā)展?jié)摿Φ姆治龇椒ā１菊撐闹饕詿晒夤庾V法和熒光偏振法分別對DNase Ⅰ活性和A549細胞及大腸桿菌0157:H7進行檢測研究。該論文構建了兩種簡單、高靈敏、高特異的檢測DNase Ⅰ活性及細胞和細菌的方法,并對酶催化活性影響因素和實際樣品進行研究。本論文由四部分組成。第1章為緒論部分,本章包括三部分,第一部分是對DNase Ⅰ進行概述,主要對核酸酶和DNase Ⅰ及其檢測方法進行介紹,此外概述了 DNA水凝膠的制備及應用;第... 

【文章來源】：陜西師范大學陜西省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

氧化石墨烯法原理檢測DNaseI活性示意圖

這種相互作用。然而，當ＤＮＡ鏈被ＤＮａｓｅ?Ｉ水解后會將雙螺旋結構解開，接著堿??基外露，堿基中電子對之間的靜電作用增強，紫外吸收也隨之增大，所以會產生??增色效應（Ｈｙｐｅｒｃｈｒｏｍｉｃ?ｅｆｆｅｃｔ），吸收光譜圖如圖１－５。因此，基于增色效應基礎，??可以用該方法檢測ＤＮａｓｅ?Ｉ的活性。??｜０，；?Ｖ／祕產??°２：?，?，?，?，???Ｉ?｛?｜?ｉ?ｉ???ｉ???２２０?２３０?２４０?２５０?２６０?２７０?２８０?２９０?３００?５１０??Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ，?ｍ／ｘ，??圖１－５増色法檢測ＤＮａｓｅ?Ｉ活性的吸收光譜圖??Ｆｉｇ．?１－５?Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＤＮａｓｅ?Ｉ?ｂｙ?ｈｙｐｅｒｃｈｒｏｍｉｃ?ｅｆｆｅｃｔ．??比色法（Ｃｈｒｏｍａｔｏｍｅｔｒｙ）是在顯色反應基礎上，一種以對比或測量有色物質??溶液顏色深淺程度來測定待測目標含量的分析方法

按照刺激響應性不同，ＤＮＡ水凝膠可分為多種敏感類型：ｐＨ、光、溫度和小分子??敏感型等水凝膠ＤＮＡ水凝膠不僅有普通凝膠的特性，又兼具ＤＮＡ原有的機??械強度高、形狀可塑、能實現(xiàn)藥物輸送等生物特性，因此可以實現(xiàn)在醫(yī)學和工業(yè)??等多方面的應用。??ＳｏｏｎｇＨｏＵｍ等人［３８］于２００６年在Ｎａｔｕｒｅ上發(fā)表一篇關于ＤＮＡ水凝膠的研??宄。原理如圖１－９所示，該工作利用５’磷酸化的ＤＮＡ構建了?Ｘ、Ｙ、Ｔ型三種形??狀的ＤＮＡ納米結構，結構的末端是具有回文結構的黏性末端，主要通過Ｔ４連接??酶將粘性末端連接從而形成化學凝膠。研究發(fā)現(xiàn)，在三種結構的凝膠中，Ｘ型結??構形成的ＤＮＡ水凝膠穩(wěn)定性更好，時間跟蹤研究表明，該結構的ＤＮＡ凝膠在室??溫下放置兩周結構依然較好，仍然穩(wěn)定存在的ＤＮＡ水凝膠比例超過７０％，而相比??于設計的輸送胰島素的ＤＮＡ結構水凝膠，其Ｙ型和Ｔ型水凝膠未降解比例減小??了?２０％，僅僅占原來的５０％，更嚴重的是，不加胰島素的空白Ｙ型ＤＮＡ結構更??不穩(wěn)定，會在２天后全部降解，與此同時，Ｔ型結構凝膠７天后降解速度也很快。??這充分說明形成凝膠初期所設計的ＤＮＡ形狀會密切影響ＤＮＡ水凝膠的穩(wěn)定性。??該發(fā)現(xiàn)也證明ＤＮＡ水凝膠可以實現(xiàn)降解，同時結合其良好的生物相容性，所以??３Ｄ細胞培養(yǎng)、藥物輸送和細胞轉移等應用的實現(xiàn)是具有很大希望的。??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]DNA水凝膠的制備及生物應用[J]. 宋萍,葉德楷,宋世平,王麗華,左小磊.  化學進展. 2016(05)
[2]大腸桿菌O157∶H7感染流行概況[J]. 王燕,謝貴林,杜琳.  微生物學免疫學進展. 2008(01)
[3]酶聯(lián)免疫技術與食品安全快速檢測[J]. 張也,劉以祥.  食品科學. 2003(08)



本文編號：3486821