目的:DNA甲基化相關(guān)因子在惡性腫瘤等疾病的診斷、治療及預(yù)后推斷中具有重要意義。傳統(tǒng)DNA甲基化檢測方法通常依賴大型檢測設(shè)備,步驟較為繁瑣,而電化學(xué)生物傳感檢測技術(shù)是近年來的研究熱點(diǎn),是一種高靈敏、低價(jià)格、易操作的檢測技術(shù)。本研究的目的在于,基于電沉積納米金、雜交鏈反應(yīng)、酶促反應(yīng)等多重信號(hào)放大手段制備新型DNA甲基化電化學(xué)生物傳感器,用于DNA甲基化檢測,以期為DNA甲基化相關(guān)疾病的診療工作提供準(zhǔn)確、靈敏的方法。方法:設(shè)計(jì)兩兩互補(bǔ)的四面體DNA納米探針序列,利用加熱變性—冷卻復(fù)性的方法使其自發(fā)互補(bǔ)結(jié)合,形成穩(wěn)定的四面體DNA納米探針,用原子力顯微鏡、聚丙烯酰氨凝膠電泳表征其合成效果。將制好的四面體DNA納米探針固定于修飾了納米金顆粒的金電極表面,經(jīng)過靶DNA序列雜交、HpaII內(nèi)切酶酶切、雜交鏈反應(yīng)擴(kuò)增及鏈霉親和素標(biāo)記的辣根過氧化物酶結(jié)合后,將電極浸入四甲基聯(lián)苯胺檢測溶液中,通過電化學(xué)方法檢測電極上發(fā)生的氧化還原電子傳遞來獲得靶DNA序列的甲基化信息。在對(duì)探針?biāo)拿骟wDNA納米探針固定時(shí)間、靶DNA雜交時(shí)間及HpaII內(nèi)切酶酶切時(shí)間等反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化后,考察最優(yōu)條件下傳感器的線性檢測范圍... 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

基于多重信號(hào)放大原理的DNA甲基化電化學(xué)生物傳感檢測機(jī)制Fig.1SchematicIllustrationoftheMultipleSignalAmplificationElectrochemicalBiosensingDetectionforDNAMethylation

TSP的AFM表征圖像

圖 2-3 電極覆蓋納米金前后在硫酸溶液（A）與[Fe(CN)6]3+/4+溶液（B）中的 CV 曲線以及覆蓋納米金后電極表面的 SEM 圖像及其逐級(jí)放大圖像，比例尺分別為 300 μm（C）、300 nm（D）、50 nm（E）Fig. 2-3 The CV characteristic curves of the electrode before and after the electrodeposition


本文編號(hào)：3440124