目的研究Nrf2基因敲除對C57BL/6J小鼠放射性腸損傷的作用,并初步闡明Nrf2和NF-κB在放射性腸損傷中的作用機(jī)制。方法本研究采用13 Gy 137Cs γ射線腹部照射野生型和Nrf2基因敲除型C57BL/6J小鼠,建立放射性腸損傷模型;觀察小鼠照射后30天存活率,并記錄體重變化;測定小鼠的脾臟和胸腺等免疫器官指數(shù)和外周血細(xì)胞數(shù)量;通過堿性“彗星”實(shí)驗(yàn)檢測外周血淋巴細(xì)胞DNA斷裂損傷程度;通過HE染色和TUNEL染色免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測小腸上皮完整性;采用免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測小腸組織Lgr5+干細(xì)胞及其子細(xì)胞的數(shù)量;采用免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)、蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)和實(shí)時(shí)定量PCR法檢測小腸組織部位NF-κBp65在細(xì)胞核內(nèi)的磷酸化水平和NF-κB下游靶基因的表達(dá)水平。結(jié)果（1）存活率:與野生型小鼠相比,Nrf2基因敲除型小鼠腹部照射后30天存活率升高,全身照射后30天存活率降低。（2）免疫功能:腹部照射后Nrf2基因敲除型小鼠的胸腺指數(shù)和外周血淋巴細(xì)胞數(shù)高于野生型小鼠;Nrf2基因敲除型小鼠的外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷程度輕于野生型小鼠。（3）小腸組織腸上皮完整性:腹部照射后野生型小鼠小腸組織... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?Ａ＾／２基因敲除后受照射小鼠的３０天存活率??Ａ．?基因敲除后腹部照射小鼠的３０天存活率??

??數(shù)及脾指數(shù)的變化。如圖２Ａ所示，基因敲除型小鼠和野生型小鼠在照射后各個??時(shí)間點(diǎn)的脾指數(shù)均無明顯差異。野生型小鼠的胸腺指數(shù)在照射后２ｄ內(nèi)持續(xù)下降，在??照射后３．５?ｄ之后趨于平穩(wěn)；ｉＶ％基因敲除型小鼠的胸腺指數(shù)在照射后第Ｉｄ下降，在??照射后２ｄ以后趨于平穩(wěn)；基因敲除型小鼠的胸腺指數(shù)在照射后２ｄ、３．５?ｄ、４?ｄ??和５?ｄ各時(shí)間點(diǎn)明顯高于野生型小鼠（圖２Ｂ）。結(jié)果表明，基因敲除減輕了由腹??部照射引起的小鼠胸腺免疫器官的損傷。??Ａ?Ｂ??Ｉｆ５］?＊ＮｒｆＺ＾－?§?｜３ｎ?＊Ｎｒｆ２：＇??１?１?％?？?〇?１?＼?？?Ｎｒｆ２＾＋??Ｉ：??Ｓｔ，?ｉｌ１－??ｗ?－?〇Ｊ?????????？?＾?ＩＪ?．?，?，?，?

圖３?７Ｖ＾／２基因敲除后腹部照射小鼠外周血細(xì)胞的數(shù)量??Ａ．�；蚯贸蟾共空丈湫∈蟮陌准�(xì)胞數(shù)??Ｂ．Ａ＾／２基因敲除后腹部照射小鼠的血小板數(shù)??Ｃ．?Ａ／（／２基因敲除后腹部照射小鼠的淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)??注：＊＊＊Ｐ＜０．００１，Ａ＾／２基因敲除型小鼠ｖｓ野生型小鼠。??３．?ＴＶｒ／２基因敲除對腹部照射后小鼠外周血淋巴細(xì)胞ＤＮＡ損傷的影響??電離輻射可誘發(fā)ＤＮＡ發(fā)生單鏈斷裂和雙鏈斷裂。“彗星”實(shí)驗(yàn)，又稱單細(xì)胞凝??膠電泳，是在單個細(xì)胞水平上有效檢測ＤＮＡ斷裂損傷程度的方法［３８－３９］。受到損傷??的細(xì)胞呈“彗星狀”拖尾，拖尾越嚴(yán)重表示ＤＮＡ發(fā)生的斷裂越嚴(yán)重�！板缧恰蔽膊�??ＤＮＡ含量、尾矩和Ｏｌｉｖｅ尾矩代表細(xì)胞發(fā)生ＤＮＡ斷裂的程度。本實(shí)驗(yàn)觀察了小鼠在??接受１３?Ｇｙ腹部照射后小鼠外周血淋巴細(xì)胞ＤＮＡ的損傷。如圖４Ａ所示，腹部照射后??小鼠淋巴細(xì)胞均發(fā)生“彗星狀”拖尾，表明淋巴細(xì)胞ＤＮＡ受到損傷，野生型小鼠淋??巴細(xì)胞核ＤＮＡ的“彗星狀”拖尾較Ａ／設(shè)基因敲除型小鼠嚴(yán)重。野生型小鼠的尾部ＤＮＡ??

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3414286