目的:利用安全高效的MRI分子影像技術(shù)早期診斷肝細胞癌對降低其死亡率具有重要意義。本研究使用由甲胎蛋白（AFP）啟動子啟動的鐵蛋白基因（Fth）作為MRI報告基因,以陽離子材料作為基因載體,轉(zhuǎn)染肝癌細胞,與正常細胞產(chǎn)生MR對比成像,在分子水平實現(xiàn)肝癌細胞的影像診斷。材料與方法:合成陽離子聚合物PEI-β-CD（PC）作為載體;通過凝膠電泳阻滯、粒徑測量及透射電子顯微鏡等表征實驗確定PC與質(zhì)粒DNA（pDNA）復(fù)合的最佳氮磷比（N/P）;通過熒光顯微鏡及流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率;利用蛋白免疫印跡、免疫熒光及普魯士藍染色實驗證明由鐵蛋白過表達所引起的細胞內(nèi)鐵聚集;通過體外細胞MRI掃描檢測對比成像效果。結(jié)果:經(jīng)環(huán)糊精（CD）修飾的陽離子聚合物PC在濃度為100μg/ml時細胞存活率接近 95%,與高分子量 PEI（HMW PEI,PEI25kD）及陽離子脂質(zhì)體 Lipofectamine2000（Lipo）相比毒性明顯降低;PC在N/P為50時可緊密復(fù)合pDNA,并形成具有適宜理化性質(zhì)的納米體系有助其順利被細胞攝取:粒徑143.25±2.49nm,多分散性指數(shù)0.211±0.02,Zeta電... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 陽離子載體/質(zhì)粒DNA的制備及理化性質(zhì)研究
    2.1 引言
    2.2 試劑與儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 陽離子聚合物的合成與表征
        2.3.2 陽離子載體/pDNA轉(zhuǎn)染體系的制備
        2.3.3 陽離子載體/pDNA轉(zhuǎn)染體系理化性質(zhì)的表征
        2.3.4 數(shù)據(jù)分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 陽離子聚合物的合成
        2.4.2 陽離子聚合物的氫譜表征
        2.4.3 質(zhì)粒及陽離子材料/pDNA的制備
        2.4.4 陽離子載體/pDNA轉(zhuǎn)染體系的表征
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第3章 陽離子載體/質(zhì)粒DNA的細胞毒性及轉(zhuǎn)染實驗研究
    3.1 引言
    3.2 試劑與儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 體外細胞毒性實驗
        3.3.2 體外轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白基因
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 體外細胞毒性實驗
        3.4.2 體外細胞轉(zhuǎn)染效率評價
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第4章 陽離子載體/鐵蛋白基因用于肝細胞癌的MR分子影像研究
    4.1 引言
    4.2 試劑與儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 鐵蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體表達檢測
        4.3.2 細胞內(nèi)鐵染色
        4.3.3 體外細胞MRI檢測
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 Western Blot法檢測鐵蛋白的表達
        4.4.2 免疫熒光法檢測轉(zhuǎn)鐵蛋白受體
        4.4.3 普魯士藍檢測細胞內(nèi)鐵
        4.4.4 MRI對比成像
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間主要的研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]靶向磁共振成像造影劑的合成及其在癌癥早期診斷中的應(yīng)用[D]. 張偉祿.華東師范大學(xué) 2011

碩士論文
[1]葉酸靶向納米復(fù)合物的制備及體內(nèi)外MR成像實驗研究[D]. 王中領(lǐng).蘇州大學(xué) 2011



本文編號：3207384