本文關(guān)鍵詞：質(zhì)粒用于乙型肝炎病毒DNA定量檢測室內(nèi)質(zhì)量控制的效果評價，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的熒光定量PCR技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高,已被廣泛應(yīng)用于乙型肝炎病毒(HBV)DNA的定量檢測,在HBV診治及預(yù)后判斷中有重要的應(yīng)用價值,而嚴(yán)格的室內(nèi)質(zhì)量控制措施是其檢測結(jié)果準(zhǔn)確可信的重要保障。為此,本研究采用基因工程方法,自制了HBV DNA定量PCR檢測室內(nèi)質(zhì)控品,并對其在臨床常規(guī)工作中的使用價值進(jìn)行初步評價。方法選取GeneBank數(shù)據(jù)庫中HBV全基因組序列共65條,涵蓋了HBV A-H八個基因型序列。經(jīng)ClustalX2軟件對HBV各個基因型序列進(jìn)行多序列比對分析后,選擇保守序列S區(qū)設(shè)計引物,擴(kuò)增得到目的基因片段后將其插入pEASY T1載體構(gòu)建重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒用血清稀釋成107 copies/ml、104copies/ml兩個水平室內(nèi)質(zhì)控品,初定靶值后用Excel繪制質(zhì)控圖并觀察精密度,進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控品的評估。結(jié)果HBV S區(qū)序列已亞克隆到pEASY T1載體,測序結(jié)果與目的片段一致。對序列進(jìn)行NCBI BLAST特異性分析發(fā)現(xiàn),該序列與GenBank中互補(bǔ)片段的一致率為99%,與已知人和其它病毒的DNA序列無相似性。自制的2個水平質(zhì)控品的批內(nèi)精密度(CV)分別為2.16%、2.76%,批間精密度(CV)分別為2.27%、3.19%,重復(fù)性、穩(wěn)定性均符合實(shí)驗要求。結(jié)論利用基因工程技術(shù)成功獲得了HBV S區(qū)重組質(zhì)粒,制備了HBV DNA2個水平的質(zhì)控品,精密度和穩(wěn)定性良好,可用于HBV DNA定量檢測的室內(nèi)質(zhì)控。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎病毒 熒光定量PCR 室內(nèi)質(zhì)控品
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R373.21;R440
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-8
• 前言8-11
• 第一章 材料與方法11-17
• 1.1 主要試驗材料11-12
• 1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)株和載體11
• 1.1.2 試驗試劑11
• 1.1.3 自配試劑11
• 1.1.4 基質(zhì)血清11-12
• 1.1.5 試驗儀器12
• 1.2 實(shí)驗方法12-17
• 1.2.1 引物設(shè)計與合成12
• 1.2.2 HBV標(biāo)準(zhǔn)株（GBW09150）基因組DNA的提取12-13
• 1.2.3 目的片段的擴(kuò)增13-14
• 1.2.4 目的DNA的膠回收14
• 1.2.5 重組質(zhì)粒的構(gòu)建14-15
• 1.2.6 自制質(zhì)控品的制備15
• 1.2.7 室內(nèi)質(zhì)控的設(shè)立15-16
• 1.2.8 評價質(zhì)控品的重復(fù)性16
• 1.2.9 質(zhì)控品穩(wěn)定性評價及自制室內(nèi)質(zhì)控圖16-17
• 第二章 結(jié)果17-21
• 2.1 PCR擴(kuò)增的S區(qū)目的片段電泳結(jié)果17
• 2.2 重組陽性質(zhì)粒的測序結(jié)果17-19
• 2.3 準(zhǔn)確性實(shí)驗結(jié)果19
• 2.4 重復(fù)性實(shí)驗結(jié)果19-20
• 2.4.1 批內(nèi)精密度及室內(nèi)靶值19
• 2.4.2 批間精密度19-20
• 2.5 穩(wěn)定性結(jié)果及自制室內(nèi)質(zhì)控圖20-21
• 第三章 討論21-24
• 第四章 結(jié)論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-28
• 綜述28-41
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 英文縮略詞表41-42
• 碩士期間研究成果42-43
• 致謝43

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本文編號：313222