基因治療所要解決的首要問題是如何將目的基因有效導(dǎo)入病變部位細胞,并使其安全、高效地表達。由于非病毒載體的毒性小,安全性高,較容易制備,能夠攜帶更大的DNA等優(yōu)點而具有非常廣闊的應(yīng)用前景。在眾多類非病毒載體中,陽離子脂質(zhì)體是一類應(yīng)用非常廣泛的非病毒載體。本論文以Boc-L-谷氨酸與油胺進行酰胺反應(yīng)與脫保護反應(yīng)生成的DoGo1為基本原料,在DoGo1的親水頭部進行酰胺反應(yīng)、脫保護反應(yīng)以及季銨化反應(yīng)生成兩種陽離子脂質(zhì)分子DoGo31和Do Go211。本文通過質(zhì)譜（MS）和氫譜（¹HNMR）的表征方法確定化合物的分子量與結(jié)構(gòu)。本文通過激光粒度與電動電勢確定化合物的均勻性與帶電情況以及確定化合物是否能夠用于轉(zhuǎn)染實驗。通過瓊脂糖凝膠電泳實驗、細胞毒性實驗以及細胞轉(zhuǎn)染實驗探究了化合物的生物活性,并與本實驗室合成出的高遞送效率的脂質(zhì)分子進行實驗對照,實驗結(jié)果表明,本論文合成的化合物與不同的輔助脂質(zhì)混合有不同的轉(zhuǎn)染效果。綜合而言,本文以本實驗合成出的高效率的脂質(zhì)分子DoGo4的結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ),在其伯胺的氨基上進行季銨化修飾,合成出兩種季銨鹽位置不同的化合物,用MS與¹

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

陽離子脂質(zhì)復(fù)合物介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)染和內(nèi)吞作用

圖 3.3 DoGo4（DOPC）、DoGo4（DOPE）、DoGo121（DOPC）、DoGo121（DOPE）、DoGo31（DOPC）、DoGo31（DOPE）對 HeLa 細胞的毒性實驗結(jié)果Fig 3.3 Experimental results of cytotoxicity of DoGo4（DOPC）,DoGo4（DOPE）,DoGo121（DOPC）,DoGo121（DOPE）,DoGo31（DOPC）,DoGo31（DOPE）on HeLa cells圖 3.3 是三種化合物（DoGo4、DoGo121、DoGo31）與兩種輔助脂質(zhì)（DOPC、DOPE）混合而成的六種脂質(zhì)復(fù)合物在 HeLa 細胞上的細胞毒性實驗結(jié)果圖。由圖可知，三種脂質(zhì)化合物與輔助脂質(zhì) DOPE 混合成的脂質(zhì)復(fù)合物相比于與輔助脂質(zhì) DOPC 混合成的脂質(zhì)復(fù)合物的細胞毒性稍大，與 DOPE 混合的每個脂質(zhì)化合物所呈現(xiàn)的細胞毒性是相當(dāng)?shù)�，與 DOPC 混合的每個脂質(zhì)化合物所呈現(xiàn)的細胞毒性也是相當(dāng)?shù)摹ＡN脂質(zhì)復(fù)合物隨著其濃度的增加，細胞毒性也有所增加，但是細胞的存活率都是大于 60%，說明這六種脂質(zhì)復(fù)合物在上述的濃度范圍內(nèi)是

圖 3.6 DoGo4(DOPC)、DoGo4(DOPE)、DoGo121(DOPC)、DoGo121 (DOPE)、DoGo31(DOPC)、DoGo31 (DOPE)與 siGAPDH 混合在 HepG2 細胞上的基因沉默結(jié)果圖Fig 3.6 Results of gene silencing on HepG2 cells by DoGo4 (DOPC), DoGo4 (DOPE),DoGo121(DOPC), DoGo121 (DOPE), DoGo31 (DOPC), DoGo31 (DOPE) complexed with siGAPDH圖 3.6 是三種化合物（DoGo4、DoGo121、DoGo31）與兩種輔助脂質(zhì)（DOPC、DOPE）混合而成的六種脂質(zhì)復(fù)合物在 HepG2 細胞上轉(zhuǎn)染 siGAPDH 的基因沉默效率圖。由圖看出，與對照組相比，六種脂質(zhì)復(fù)合物轉(zhuǎn)染 siGAPDH 后，細胞內(nèi)的 GAPDH 的 mRNA 的表達水平都有所下降。不同輔助脂質(zhì)與 DoGo4、DoGo121混合而成的脂質(zhì)復(fù)合物轉(zhuǎn)染 siGAPDH 后，siGAPDH 的基因沉默相差不大，而不同中性輔助脂質(zhì)與 DoGo31 混合所達到的基因沉默效率不同。且 DoGo31(DOPE)下調(diào) mRNA 的能力可達 50%以上，而 DoGo31(DOPC)下調(diào) mRNA 的能力相對較弱。這也說明輔助脂質(zhì)對 DoGo31 有很大的影響。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]陽離子聚合物基因載體:進展與展望[J]. 張穎,周志平.  應(yīng)用化工. 2018(01)
[2]基因治療:現(xiàn)狀與展望[J]. 王嬙,張琳,陳賽娟.  中國基礎(chǔ)科學(xué). 2017(04)
[3]麻醉面罩的體外細胞毒性試驗研究[J]. 高勇,李強,趙小磊,張娟麗,周靜.  中國醫(yī)療器械信息. 2016(17)
[4]非病毒載體在基因治療中的研究進展[J]. 李婉迪,趙振民.  新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2016(08)
[5]用于基因轉(zhuǎn)染的陽離子脂質(zhì)體研究進展[J]. 曹詠梅.  化學(xué)試劑. 2015(06)
[6]陽離子聚合物納米基因載體在內(nèi)耳的應(yīng)用進展[J]. 王方園,吳南,陳正一,楊仕明.  中華耳科學(xué)雜志. 2015(01)
[7]多肽介導(dǎo)的核酸藥物遞送系統(tǒng)研究進展[J]. 丁曉然,王升啟.  藥學(xué)進展. 2015(02)
[8]脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染N2a細胞的優(yōu)化方法[J]. 趙云鶴,王若楠,楊桂姣,陸利.  中國組織工程研究. 2014(29)
[9]siRNA反向轉(zhuǎn)染人肺動脈平滑肌細胞的條件優(yōu)化[J]. 趙垚,白振忠,蘇效東,李斌,韓士瑞,馮仁杰.  廣州醫(yī)藥. 2014(02)
[10]核磁共振波譜在分析化學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用的新進展[J]. 王桂芳,馬廷燦,劉買利.  化學(xué)學(xué)報. 2012(19)

博士論文
[1]聚賴氨酸基非病毒載體的設(shè)計與制備[D]. 周德重.南開大學(xué) 2012

碩士論文
[1]激光誘導(dǎo)液相合成金屬納米復(fù)合材料及光學(xué)特性研究[D]. 王大猛.山東大學(xué) 2017
[2]超順磁性納米氧化鐵的制備及性能研究[D]. 陳玉磊.西南科技大學(xué) 2016
[3]陽離子聚合物修飾的硅納米線陣列在基因轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用[D]. 潘靜靜.蘇州大學(xué) 2016
[4]氯丙嗪與三氟拉嗪對肺癌的作用及機制研究[D]. 陳波.天津科技大學(xué) 2016
[5]葡萄糖陽離子脂質(zhì)體基因載體的合成和性能研究[D]. 何成喜.湖南師范大學(xué) 2015
[6]基于POSS核的響應(yīng)性基因載體的構(gòu)建[D]. 楊艷宇.北京化工大學(xué) 2014
[7]豬成纖維細胞脂質(zhì)體或電穿孔轉(zhuǎn)染pEGFP-N1條件的優(yōu)化[D]. 季索菲.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[8]Pluronic修飾的聚陽離子非病毒基因載體的構(gòu)建、表征及體外轉(zhuǎn)染效率評價[D]. 王翔.第二軍醫(yī)大學(xué) 2011
[9]水溶性殼聚糖功能化碳納米管的研究[D]. 李英.北京化工大學(xué) 2010
[10]大強度離心運動對發(fā)育期大鼠骨骼肌纖維類型及MyoD、myogenin表達的影響[D]. 廖艷萍.湖南師范大學(xué) 2009



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